[发明专利]结核分歧杆菌复合群的免疫检出方法

说明书

本申请是2010年7月27日进入中国的申请号为200880125685.5（PCT/JP2008/073200，国际申请日2008年12月19日）的专利申请“结核分歧杆菌复合群的免疫检出方法”的分案申请。

技术领域

本发明涉及使用结核分歧杆菌复合群(Mycobacteriumtuberculosis complex)特异性分泌蛋白MPB64的抗体的免疫检出方法，并且更具体地涉及夹心免疫测定方法，特别是免疫色谱测定方法和免疫色谱测试条(test strip)。本发明涉及检出方法，该方法对于通过高灵敏度特异地检出结核分歧杆菌复合群来快速、安全和高准度诊断结核分歧杆菌复合群感染是有用的。

背景技术

MPB64是由牛分歧杆菌BCG(Mycobacterium bovis BCG)产生并分泌到细菌细胞外的分枝杆菌蛋白。另外，MPT64作为由结核分歧杆菌特异性产生并分泌到细菌细胞外的分枝杆菌蛋白之一为人们所知。已知MPT64是与MPB64相同的物质。这意味着MPB64的抗体也是MPT64的抗体。

因此，通过培养病原性无害牛分歧杆菌BCG、提取并纯化培养物中产生的MPB64，利用MPB64作为抗原获得抗MPB64抗体，并使用该抗体通过抗原-抗体反应(免疫反应)检出样品中的MPT64，能够诊断结核分歧杆菌复合群感染。

已知有利用MPB64的抗体(以下，简写为“抗MPB64抗体”）通过免疫方法检出结核分歧杆菌的方法(参见专利文献1)。另外，作为免疫方法还已知使用免疫色谱的测定方法(参见专利文献2)。

然而，这些已知方法需要在进行免疫测定前，通过培养来增殖样品中的结核分歧杆菌复合群以分泌MPT64，该培养需要大约一周。

另外，即使常规免疫色谱方法与大多数非结核性分枝杆菌(NTB)没有反应性，只与结核分歧杆菌复合群具有非常强的反应性，已报道它们仍显示与两株非结核性分枝杆菌即，海分歧杆菌(Mycobacterium marinum)和苦参分歧杆菌(Mycobacteriumflavescens)的交叉反应性(非专利文献1)。

专利文献1：日本专利特开平07-110332

专利文献2：日本专利特开平11-108931

非专利文献1：ABE C.等，“Simple and Rapid Identificationof the Mycobacterium tuberculosis Complex byImmunochromatographic Assay Using Anti-MPB64 MonoclonalAntibodies”,Journal of Clinical Microbiology,1999年11月,第3693-3697页。

发明内容

发明要解决的问题

本发明的目的是特异性检出生物试样中的MPT64抗原，从而能够以比以前更高的准确度进行结核分歧杆菌复合群感染的诊断。

另外，本发明另外的目的是以高灵敏度检出生物试样中的MPT64抗原，从而在未经培养或在样品中的结核分歧杆菌复合群细菌实质上开始增殖之前培养一段时间后的情况下，能够对生物试样进行免疫测定，并能够比以前更快速和安全地进行结核分歧杆菌复合群感染的诊断。

用于解决问题的方案

本发明人通过将MPB64作为免疫原免疫小鼠，已成功获得MPB64的特异性抗原表位的抗体，并发现在免疫测定，特别在夹心免疫测定，尤其在免疫色谱测定中，使用上述抗体能够更特异地以比以前更高的灵敏度检出结核分歧杆菌复合群。由此，完成了本发明。

即，根据本发明的一方面，提供检出结核分歧杆菌复合群的方法，该方法包括使用结核分歧杆菌复合群特异性分泌蛋白MPB64的抗体的免疫测定，其中所述抗体包括位于SEQ IDNOS:2-4的任一氨基酸序列的MPB64抗原表位的抗体。

并不特别限定用于本检出方法的免疫测定，但是优选夹心免疫测定法、特别是ELISA(酶联免疫吸附测定)法和免疫色谱测定法等。

因此，根据本发明的另一方面，提供检出结核分歧杆菌复合群的方法，该方法包括使用结核分歧杆菌复合群特异性分泌蛋白MPB64的第一和第二抗体的夹心免疫测定，其中第一和第二抗体的至少之一包括位于SEQ ID NOS:2-4的任一氨基酸序列的MPB64抗原表位的抗体。