[发明专利]一种rs6311的检测试剂盒

权利要求书

1.一种rs6311的检测试剂盒，该试剂盒包括探针，引物，MIX反应液，

其中所述探针，序列如下：rs6311T-fam ：CTGTGAGTGTCTGGC

rs6311C-vic： CTGTGAGTGTCCGGC

其中所述引物，序列如下：

rs6311-F ：AGAGAGAACATAAATAAGGCTAGAAAACAGTA

rs6311-R ：CACTGTTGGCTTTGGATGGA。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其中，试剂盒中装有：荧光反应管，去离子三蒸水，MIX反应液；

其中荧光反应管中装有以下探针和引物：

其中所述探针，序列如下：rs6311T-fam ：CTGTGAGTGTCTGGC

rs6311C-vic： CTGTGAGTGTCCGGC

其中所述引物，序列如下：

rs6311-F ：AGAGAGAACATAAATAAGGCTAGAAAACAGTA

rs6311-R ：CACTGTTGGCTTTGGATGGA。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其中，探针配制成：25μM，引物配制成：20μM。

4.根据权利要求1所述的试剂盒，其中，各试剂的比例如下：

每条探针0.1微升，每条引物0.8微升，去离子三蒸水，用1.5毫升小瓶盛装，MIX用1.5毫升小瓶盛装。

5.根据权利要求1所述的试剂盒，其中还包括石蜡油。

6.权利要求1所述试剂盒的使用方法，包括以下步骤：

患者全血基因组DNA提取，提取方法如下：

在1.5毫升离心管中加入10微升蛋白酶K和100微升待检样品(EDTA抗凝全血)，并混匀，2000rpm离心10秒，加入200微升缓冲液B，颠倒混匀，56℃放置10分钟，期间颠倒混匀2-3次，加入200微升无水乙醇，颠倒混匀，并加入吸附柱中，12000rpm离心30秒，倒掉非也，将吸附柱放回收集管，向吸附柱中加入500微升缓冲液C，12000rpm理性30秒，倒掉废液，将吸附柱放回收集管，向吸附柱中加入700微升漂洗液W2，12000rpm离心30秒，倒掉废液，将吸附柱放回收集管，向吸附柱中加入500微升漂洗液W2，12000rpm离心30秒，倒掉废液，将吸附柱放回收集管，然后12000rpm离心2分钟，将吸附柱置于一个新的1.5毫升离心管中，室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液，向吸附膜中间部位悬空滴加100微升洗脱缓冲液TE，室温放置2-5分钟，12000rpm离心2分钟，收集管中即为基因组DNA，

PCR扩增：方法如下：

使用GeneCopoeia公司所提供的2*Probe AllinOne Q-PCR Mix按照合适的比例加入MIX，探针，引物以及上一步提取出来的基因组DNA，最后加入石蜡油，在荧光PCR仪上按照以下程序进行扩增：95℃10分钟---40次循环（95℃10秒-60℃30秒），

按照扩增曲线进行单链多态性分析待检样品的基因型，方法如下：

使用单链多态性分析仪器，如使用BIO-RAD iQ5仪，通过Taq-man荧光PCR检测候检位点待检样品的基因型，不同的基因型显示的结果是不相同的，如正常代谢组（CC型）显示的结果为：VIC标记探针扩增，

缓慢代谢组（CT型和TT型）显示的结果为：FAM标记探针和VIC标记探针同时扩增，或者FAM标记探针扩增。