[发明专利]同步检测向日葵黑茎病菌和向日葵茎溃疡病菌的三重PCR引物及其扩增方法和用途

说明书

技术领域

本发明涉及PCR技术检测寄生于向日葵中向日葵黑茎病菌（Leptosphaeria lindguistii）和向日葵茎溃疡病菌（Diaporthe helianthi）的三重PCR引物及其扩增方法和用途，属于菊科向日葵中向日葵黑茎病菌和向日葵茎溃疡病菌检测领域。 

背景技术

向日葵（Helianthus annuus）属一年生草本植物，是我国五大油料作物之一，向日葵种植简单、抗旱抗逆性强，依据其用途，分油用型、食用型和中间型3个类型。向日葵适应性强，对栽培环境条件要求不高，较之玉米、大豆更能适应恶劣气候。向日葵是近年来世界上发展很快的一种新兴油料作物，由于其含油率高达5 0%以上，品质好等优点成为食品加工、化工、燃料工业、饲料加工业和医药等原料，其市场前景无限广阔（曹孟梁.国内向日葵发展概况及经济价值.山西农业,2008,(16):19-20）。 

目前向日葵的平均产量仅1828kg/hm²，种子含油量仅25%～32%，，均远低于现有栽培品种的生物学潜能，这主要是由于病害所致（冉俊祥.向日葵病害种类分布和防治.国外农学—向日葵,1991,(4):17）。近年来我国不断从国外进口向日葵种子，仅2010年就达3082.46吨，其中90%以上来自阿根廷、法国、美国等向日葵黑茎病、茎溃疡疫区。2005年～2007年在新疆伊犁河谷发现并鉴定向日葵黑茎病为一种蔓延迅速、危害严重的向日葵病害(陈卫民等.国内新病害—向日葵茎点霉黑茎病在新疆伊犁河谷的发生初报.云南农业大学报,2008,23(5):610-612）。2010年，天津口岸在来自阿根廷、法国的向日葵种子中，检出检疫性有害生物向日葵黑茎病菌Leptosphaerialindguistii（Luo JF et al.,  Detection and identification of Phoma macdonaldii in sunflower seeds imported from Argentina.AustralasianPlant Pathology,2011,40(5):504-509），这是国内首次自进境向日葵种子中截获向日葵黑茎病菌，由于其对向日葵的严重危害，质检总局发布警示通报，与农业部于2010年联合发布公告将其列入进境植物检疫性有害生物名录，并指定天津局制定行业标准。 

向日葵黑茎病菌（L.lindguistii）和向日葵茎溃疡病菌（D.Helianthi）是向日葵上寄生的两种重要检疫性真菌病害。L.lindguistii无性态为茎点霉属Phoma，D.helianthi为拟茎点霉属Phomopsis。1987年Aerette和Gulga首次报道了该病的发生，以及病原菌的分离、鉴定与回接等，向日葵黑茎病发病初期在向日葵叶柄基部出现黑色斑点，并迅速沿茎杆扩展至整个植株，导致小、空、瘪的向日葵籽产生，使种子产量和油产量严重降低，早期发病植株枯死，发病较晚者则矮化瘦弱，倒伏，重病田发率100%，死亡率达51%以上。1980年首次在南斯拉夫发现和鉴定的向日葵茎溃疡病菌（Muntanola-Cvetkovic Met al.,On the identity of the causative agentof a serious Phomopsis Diaporthe disease in sunflower plants.NovaHedwigia,1981,34:417-435），随后在法国和美国也发现此病害，主要侵染植株的叶部、茎部、头状花序，叶片病斑棕色或黑色，可致茎秆萎蔫、干枯变黑，葵盘发育不良，不能形成成熟的种子或致干枯败育。1984年法国出现此病害后，损失达田间向日葵作物总量的40%左右。