[发明专利]一种检测MTHFR基因多态性的方法

权利要求书

1.一种检测MTHFR基因多态性的方法，其包括以下步骤：

使用SEQ ID NO.1和/或SEQ ID NO.2所示的扩增引物扩增MTHFR基因的扩增步骤，优选地，所述的引物对可以被生物素标记。

2.一种检测MTHFR基因多态性的方法，其包括以下步骤：

（1）使用SEQ ID NO.1和/或SEQ ID NO.2所示的扩增引物扩增MTHFR基因的扩增步骤；

（2）将步骤（1）获得的扩增产物变为单链DNA模板的步骤；

（3）使用SEQ ID NO.3所示的测序引物对步骤（2）获得的单链DNA模板进行焦磷酸测序的步骤。

3.权利要求1或2的方法，其中所述的扩增条件为：95℃预变性15min；94℃变性30s，60℃退火30s，72℃延伸30s，共45个循环；72℃延伸10min。

4.权利要求1或2的方法，该方法用于检测MTHFR基因C677T的多态性；优选地，所述的MTHFR基因来源于人全血或人口腔上皮细胞。

5.权利要求2的方法，其中，步骤（2）是将步骤（1）得到的扩增产物加入结合缓冲溶液和链霉亲和素包被的磁珠，在室温下孵育一定时间，优选15秒；与磁珠结合后的PCR产物在乙醇溶液（优选为70%乙醇溶液）中洗涤一定时间（优选洗涤5秒）、变性液中孵育一定时间（优选5秒）、洗脱液中孵育一定时间（优选10秒），得到单链DNA模板；

优选地，权利要求2的方法，其中，步骤（3）还包括以下步骤，

将步骤（2）获得的单链DNA模板转入含有SEQ ID NO.3所示的测序引物的退火缓冲液中，在合适的温度条件下（例如80℃）孵育一定时间（例如2分钟），冷却至室温，得到单链测序模板；

优选地，步骤（3）中进行焦磷酸测序时，按照以下碱基分配顺序进行焦磷酸测序反应：TAGACTCTGCACGTA。

6.用于MTHFR基因扩增的引物对，其序列如SEQ ID NO.1和SEQID NO.2所示；优选地，所述的引物对可以被生物素标记；进一步优选地，SEQ ID NO.1所示的引物被生物素标记。

7.用于检测MTHFR基因多态性的测序引物，其序列如SEQ IDNO.3所示。

8.一种基因扩增试剂盒，其中含有权利要求7的引物对，和任选的扩增所需的其他试剂。

9.一种检测试剂盒，其含有权利要求7的引物对，和权利要求8所述的测序引物，和任选的测序反应所需的其他试剂，优选的其他试剂为焦磷酸测序反应所需的试剂。

10.权利要求6的引物对、或权利要求7的测序引物、或权利要求8的基因扩增试剂盒、或权利要求9的检测试剂盒的用途，在检测MTHFR基因多态性中的用途；优选用于检测MTHFR基因C677T的多态性；优选地，所述的MTHFR基因来源于人全血或人口腔上皮细胞。