[发明专利]一种最适温度提高的脂肪酶突变体及其应用

权利要求书

1.一种最适温度提高的脂肪酶突变体，其特征在于在GenBank EF405962公布的脂肪酶基因序列第310的氨基酸由Asp替换成Val。

2.一种获得权利要求1所述脂肪酶突变体的方法，其特征在于以GenBank EF405962公布的脂肪酶脂肪酶基因序列为出发基因，将其第310位的氨基酸由Asp替换成Val。

3.产权利要求1所述脂肪酶突变体的基因工程菌或转基因细胞系。

4.权利要求3所述产脂肪酶突变体的基因工程菌的构建方法，其特征在于包括如下步骤：

1）采用化学全合成或PCR方法克隆编码权利要求1所述脂肪酶突变体基因；

2）将步骤1）获得的脂肪酶基因连接到大肠杆菌表达载体，得到重组表达载体；

3）将步骤2）获得的重组表达载体转化毕赤酵母GS115得到基因工程菌。

5.权利要求4所述的基因工程菌，其特征在于所述表达载体为pPIC9K，pPIC3.5K，pPICZα或pPICZ。

6.应用权利要求4所述基因工程菌发酵生产脂肪酶突变体的方法，其特征在于以产脂肪酶突变体基因工程菌为生产菌株，按10％（V/V）接种量接入25mL BMGY培养基中，30℃振荡培养16～20h至OD600为2～6，离心收集菌体，用BMMY培养基稀释至OD600为1，每隔24h添加0.5%的甲醇诱导表达，培养3-4d后，收集发酵上清液；将发酵上清液经过10KD超滤膜浓缩，SP-Sepharose FF强阳离子交换层析和Phenyl-Sepharose 6FF疏水色谱柱层析后得到纯化的突变脂肪酶活性组分。

7.权利要求1所述脂肪酶突变体应用于油脂加工、合成生物柴油或面包烘焙领域。