[发明专利]一种蛋白质泛素化快速检测载体及其应用

权利要求书

1.一种蛋白质泛素化快速检测载体，其特征在于具有两套启动子-终止子序列TEF启动子-ADH1终止子和GPD启动子-CYC1终止子，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.根据权利要求1所述载体，其特征在于TEF启动子-ADH1终止子之间具有多克隆位点MCS-linker结构-增强型绿色荧光蛋白EGFP的C端编码序列GC，结构为TEF启动子-MCS-linker-GC-ADH1终止子。

3.根据权利要求1所述载体，其特征在于GPD启动子-CYC1终止子之间具有增强型绿色荧光蛋白EGFP的N端编码序列GN-linker结构-泛素编码基因UBI3，结构为GPD启动子-GN-linker-UBI3-CYC1终止子。

4.根据权利要求2或权利要求3所述载体，其特征在于linker结构的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.2所示。

5.根据权利要求2所述载体，其特征在于多克隆位点MCS包括限制性酶切位点Not I、EcoR I、Sal I、Sma I、Ava I、Xma I、Sac II，其DNA序列如SEQ ID NO.3所示。

6.根据权利要求3所述载体，其特征在于，泛素编码基因UBI3的DNA序列如GENBANKID:850864所示。

7.权利要求1所述载体的构建方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)利用融合PCR的方法，构建融合基因MCS-linker-GC和GN-linker-UBI3；

(2)将质粒pY26-TEF-GPD与融合基因GN-linker-UBI3共同使用BamH I、Xho I双酶切，胶回收后将酶切片段进行连接，即可将该融合基因插入到GPD启动子-CYC1终止子之间；

(3)将步骤(2)所得质粒与融合基因MCS-linker-GC共同使用Not I、Bgl II双酶切，胶回收之后将酶切片段进行连接，即可将融合基因MCS-linker-GC插入至TEF启动子-ADH1终止子之间；

(4)将泛素编码基因UBI3引入到步骤(3)中获得载体的多克隆位点即可用于待研究蛋白编码基因的插入。

8.权利要求1所述载体的应用，其特征在于使用其它基因替代其中的泛素编码基因UBI3，用于其它功能基因或调控基因的研究。