[发明专利]一种黑曲霉菌株生产的脂肪酶及其生产方法和应用

权利要求书

1.一种黑曲霉菌株生产的脂肪酶，其特征在于，所述黑曲霉（Aspergillusniger）AN0512，已于2012年11月19日，在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，简称CGMCC，保藏编号为CGMCC No.6835。

2.权利要求1所述脂肪酶的生产方法，其特征在于，包括如下步骤：

将处于对数生长期的黑曲霉（Aspergillus niger）AN0512菌悬液接种于液体发酵培养基，接种量为1.4%-1.6%v/v，进行发酵培养，将得到的发酵液离心或过滤去除菌体即得粗酶液；液体发酵培养基主要包括w/w：橄榄油0.8%-1.2%，酵母提取物0.5%-2%，pH5.0-7.0。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述粗酶液还经如下分离纯化步骤：粗酶液经百分饱和浓度为50-70%w/v的硫酸铵沉淀，离心取沉淀，用磷酸盐缓冲液溶解沉淀，离心去沉淀，将清液透析除盐后，采用阴离子层析、分子排阻层析分离，获得电泳纯脂肪酶。

4.根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于，所述发酵培养条件为：搅拌转速150-250r/m，培养温度27-29℃，发酵时间90-100h。

5.根据权利要求2所得粗酶液的应用，其特征在于，所述粗酶液用于催化酯交换或酯化反应的温度为25-60℃，pH为4.0-10.0。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述粗酶液催化反应的温度为27-35℃，pH为6.0-8.0。

7.根据权利要求3所得电泳纯脂肪酶的应用，其特征在于，所述脂肪酶用于催化酯交换或酯化反应的温度为20-60℃，pH为3.0-8.0。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述脂肪酶催化反应的温度为45-55℃，pH为4.0-6.0。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述脂肪酶的催化反应温度为50℃，pH为5.0。

10.根据权利7~9任意一项所述的应用，其特征在于，在所述酯交换或酯化反应中添加Cu²⁺、Ca²⁺、Co²⁺、甲醇、乙醇、异丙醇、丙酮或丁醇以促进脂肪酶的催化反应。