[发明专利]一种耐酸性淀粉酶突变体及其制备方法和应用无效
| 申请号： | 201210532851.1 | 申请日： | 2012-12-12 |
| 公开（公告）号： | CN102965359A | 公开（公告）日： | 2013-03-13 |
| 发明（设计）人： | 陈坚;堵国成;刘龙;李江华;杨海泉 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N9/28 | 分类号： | C12N9/28;C12N15/56;C12N15/10;C12N15/70;C12R1/125 |
| 代理公司： | 北京爱普纳杰专利代理事务所(特殊普通合伙) 11419 | 代理人： | 何自刚;王玉松 |
| 地址： | 214122 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 耐酸 淀粉酶 突变体 及其 制备 方法 应用 | ||
【权利要求书】：
1.一种耐酸性淀粉酶突变体，其特征在于，淀粉酶催化区域内组氨酸替换为天冬氨酸。
2.权利要求1所述突变体，其特征在于，以SEQ ID NO.1为出发序列，分别将第222位、第275位、第293位和第310位的组氨酸突变成天冬氨酸得到的突变体。
3.权利要求1所述淀粉酶突变体的制备方法，其特征在于，将催化区域内组氨酸突变成天冬氨酸。
4.权利要求3所述方法，其特征在于，以SEQ ID NO.1为出发序列，分别将第222位、第275位、第293位和第310位的组氨酸突变成天冬氨酸。
5.权利要求3所述方法，其特征在于，步骤如下：
1）根据枯草芽孢杆菌淀粉酶序列SEQ ID NO.1所示，采用化学全合成的方法全合成
后克隆到质粒pET-20b(+)中，构建重组质粒pAmyQ；
2）利用Swiss-model软件对源自枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）淀粉酶进行模拟，获得淀粉酶空间结构；
3）通过对淀粉酶空间结构进行分析，确定要突变的组氨酸位点；
4）设计突变引物，对淀粉酶基因序列进行定点突变，将组氨酸位点突变为天冬氨酸，获得含有突变淀粉酶序列的重组载体；
5）将突变后重组载体转化大肠杆菌BL21，诱导表达，获得淀粉酶突变体。
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