[发明专利]一种高催化效率碱性淀粉酶突变体及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种高催化效率碱性淀粉酶突变体，其特征在于，是淀粉酶的N端区域与短肽通过PT-linker连接得到的突变体。

2.权利要求1所述突变体，其特征在于，所述短肽氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

3.权利要求1所述突变体，其特征在于，所述淀粉酶氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

4.一种高催化效率碱性淀粉酶突变体，其特征在于，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的淀粉酶N端区域与氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的短肽通过PT-linker连接得到的突变体。

5.权利要求1-4任一所述突变体，其特征在于，所述PT-linker序列如SEQ ID NO.3所示。

6.一种制备权利要求1所述淀粉酶突变的方法，其特征在于，步骤如下：

1)据短肽序列，采用化学全合成的方法全合成后克隆到质粒pET-22b(+)中，构建重组质粒pET-22b(+)-P；

2)根据嗜碱芽孢杆菌的淀粉酶序列，采用化学全合成的方法全合成；

3)针对已分析序列设计引物，将全合成的淀粉酶序列克隆到重组质粒pET-22b(+)-P中，构建含有短肽和淀粉酶片段的重组质粒pAAQ-P，将短肽融合到碱性淀粉酶的N-端，获得含有突变淀粉酶序列与短肽序列融合状态的重组载体；

4)将突变后重组载体转化大肠杆菌BL21，诱导表达，获得突变株。

7.权利要求4所述制备方法，其特征在于，所述短肽氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。权利要求4所述制备方法，其特征在于，所述淀粉酶氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。