[发明专利]防治芝麻枯萎病的生防菌、分离方法、菌剂及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种防治芝麻枯萎病的生防菌，同时涉及该生防菌的分离方法、该生防菌菌剂及其应用，属于植物保护技术领域。 

背景技术

植物枯萎病是一类重要的植物土传病害，主要致病菌是尖孢镰刀菌，这种病害从植物根部危害植物，可造成植物的大规模减产。其中，芝麻就是被危害最严重的一种农作物。 

芝麻（Sesamum indicum），隶属于胡麻科胡麻属，是世界上最古老的油料作物之一，也是我国重要的优质油料作物。我国芝麻年种植面积1200万亩左右，总产量约75万吨，在国际油料贸易中具有重要的地位。芝麻枯萎病是（Sesame Fusarium wilt，SFW）由尖孢镰刀菌芝麻专化型（Fusarium oxysporum f.sp.sesami(Zaprometoff)Castellani，FOS）病菌侵染引起的一种土传真菌病害。芝麻在全生育期均可被尖孢镰刀菌侵染。该病属于世界性病害，印度、苏丹、埃及和巴基斯坦等许多芝麻生产国每年均有不同程度发生。该病在我国主要发生在东北、华北、西北、黄淮以及江淮部分地区，常年发生率15%左右，严重发生时可达30%以上，常导致芝麻种子不成熟、籽粒瘦瘪，易在收获前炸落，严重威胁和阻碍着芝麻的生产与发展。以往传统方法主要靠化学农药防治农作物枯萎病病害，但是随着化学农药的大量使用，对自然环境造成了严重的污染，也危害了人类的健康。而且，化学农药的大量使用也使枯萎病病原菌产生了耐药性，防治枯萎病效果大打折扣。 

发明内容

本发明的目的是提供一种防治芝麻枯萎病的生防菌。 

为了实现以上目的，本发明所采用的技术方案是提供一种防治芝麻枯萎病的生防菌，所述生防菌为皮奥显亚类芽孢杆菌（Paenibacillus peoriae）SF4-11，保藏日期：2012年11月28日，保藏单位：中国典型培养物保藏中心，保藏地址，湖北省武汉市武昌珞珈山武汉大学保藏中心，保藏号：CCTCC NO:M2012489。 

本发明的目的还在于提供一种防治芝麻枯萎病的生防菌的分离方法。 

本发明所采用的技术方案还在于提供一种防治芝麻枯萎病的生防菌的分离方法，包括以下步骤： 

1）病原菌及土壤微生物的分离： 

a）病原菌的分离： 

取芝麻枯萎病发病植株，对芝麻植株的病杆进行消毒、清洗，再将病感中央维管束组织放入含有50μg/mL氯霉素的PDA培养基上，在26-28℃条件下培养3-4d，然后将优势菌落在PDA培养基中培养3-4d后，进行单孢分离纯化，保存备用； 

b）土壤微生物的分离： 

称取紫花地丁根部土壤，加入无菌水，采用浓度梯度法稀释土壤悬液，取浓度梯度土壤悬液均匀涂布在1/10TSA培养平板上，在26-28℃条件下，倒置培养1-2d；将生长出的菌落接种于TSA培养基进行分离纯化，然后将纯化的细菌与50%甘油等量混合-70℃冷冻保存备用； 

2）拮抗菌筛选： 

将培养的不同土壤细菌与尖孢镰刀菌芝麻专化型在PDK培养基上对峙培养，判断有无拮抗作用； 

3）对拮抗菌进行鉴定分类。 

所述芝麻植株病杆为芝麻杆病健交界处的茎杆。 

所述PDA培养基：马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂粉15g，蒸馏水1000mL，pH7.0-7.2，121℃湿热灭菌20min。 

所述1/10TSA培养基为：TSB(Trypticase Soya Broth，Difco.)3g，琼脂15g，蒸馏水1000mL，pH7.0-7.2，121℃湿热灭菌20min。 

所述TSA培养基为：TSB(Trypticase Soya Broth，Difco.)30g，琼脂15g，蒸馏水1000mL，pH7.0-7.2，121℃湿热灭菌20min。 

所述PDK培养基：马铃薯200g，葡萄糖20g，蛋白胨10g，琼脂15g，蒸馏水1000mL，pH7.0-7.2，121℃湿热灭菌20min。 

本发明的目的还在于提供一种防治芝麻枯萎病的生防菌菌剂。 

本发明所采用的技术方案还在于提供一种防治芝麻枯萎病的生防菌菌剂，将生防菌接种在LB液体培养基中，在30-33℃条件下振荡培养2-3d，离心，取沉淀加入无菌水即得。 

所述LB液体培养基为：酵母提取物5g，蛋白胨10g，氯化钠10g，琼脂15g，蒸馏水1000mL，pH7.0-7.2，121℃湿热灭菌20min。