[发明专利]一种利用海洋胶原蛋白酶MCP-01制备胶原蛋白小肽的方法有效
申请号: | 201210540438.X | 申请日: | 2012-12-13 |
公开(公告)号: | CN102994601A | 公开(公告)日: | 2013-03-27 |
发明(设计)人: | 张玉忠;冉丽媛;王磊;刘德华;陈秀兰;宋晓妍;秦启龙;苏海楠;周百成 | 申请(专利权)人: | 山东大学 |
主分类号: | C12P21/06 | 分类号: | C12P21/06 |
代理公司: | 济南金迪知识产权代理有限公司 37219 | 代理人: | 王绪银 |
地址: | 250012 山*** | 国省代码: | 山东;37 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 利用 海洋 胶原 蛋白酶 mcp 01 制备 蛋白 方法 | ||
1.一种利用海洋胶原蛋白酶MCP-01制备胶原蛋白小肽的方法,其特征在于,包括如下步骤:
(1)将海洋胶原蛋白酶MCP-01溶于Tris-HCl缓冲液中,配成酶浓度为0.3~0.5mg/mL的酶液;
(2)按照重量体积比为18~22:1的比例将牛肌腱I型不可溶胶原蛋白加入酶液中,单位mg/ml,在45~50℃的水浴锅中反应24~26小时,在4℃条件下,13000转/分钟离心10~15min,制得胶原蛋白肽;
(3)上述胶原蛋白肽经过截留量为3000Da的超滤管超滤离心,收集下层滤过物,即制得胶原蛋白小肽。
2.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述步骤(1)中,Tris-HCl缓冲液浓度为50mM,pH9.0。
3.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述步骤(1)中,酶液中酶浓度为0.4mg/mL。
4.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述步骤(2)中,牛肌腱I型不可溶胶原蛋白与酶液的重量体积比为20:1。
5.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述步骤(2)中,反应条件为50℃的水浴锅中反应24小时。
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