[发明专利]一种体外扩增NK细胞的方法无效
| 申请号： | 201210541658.4 | 申请日： | 2012-12-13 |
| 公开（公告）号： | CN102994449A | 公开（公告）日： | 2013-03-27 |
| 发明（设计）人： | 叶永清;杨雪晶;苏国新 | 申请（专利权）人： | 上海柯莱逊生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0783 | 分类号： | C12N5/0783 |
| 代理公司： | 上海三方专利事务所 31127 | 代理人： | 吴干权;钱品兴 |
| 地址： | 201201 上海市浦东新区张江*** | 国省代码： | 上海;31 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 体外 扩增 nk 细胞 方法 | ||
1.一种体外扩增NK细胞的方法，其特征在于所述的方法由以下步骤组成：
a.将外周血单个核细胞接种在CD3McAb和CD226McAb预包被的培养瓶中共培养，
b.加入IL-2和IL-18共培养72小时以刺激扩增NK细胞，
c.将NK细胞与经致死处理的K562细胞和含有IL-2和IL-18的无血清培养基转入细胞培养袋中共培养，
d.收获NK细胞。
2.如权利要求1所述的体外扩增NK细胞的方法，其特征在于用CD226提升NK细胞中表面活化分子CD69的表达水平、细胞因子IFNγ的分泌和杀伤颗粒CD107a的表达水平。
3.如权利要求1所述的体外扩增NK细胞的方法，其特征在于步骤（b）为，加入IL-2和IL-18，并放入37℃、5%CO2的饱和湿环境中培养72小时。
4.如权利要求1所述的体外扩增NK细胞的方法，其特征在于步骤（c）中，根据细胞生长情况持续补充含有IL-2和IL-18的无血清培养基。
5.如权利要求1所述的体外扩增NK细胞的方法，其特征在于步骤（c）中，所述的NK细胞与经致死处理的K562细胞的细胞数比例为1:1。
6.如权利要求1所述的体外扩增NK细胞的方法，其特征在于外周血单个核细胞的浓度为1.5×106 /ml。
7.如权利要求1所述的体外扩增NK细胞的方法，其特征在于所述CD226McAb的使用浓度为50ng/ml~200ng/ml。
8.如权利要求1所述的体外扩增NK细胞的方法，其特征在于所述IL-18的使用浓度为5ng/ml~50ng/ml。
9.如权利要求1所述的体外扩增NK细胞的方法，其特征在于所述无血清培养基中含有人血白蛋白，所述人血白蛋白使用浓度为0.5%。
10.如权利要求1所述的体外扩增NK细胞的方法，其特征在于所述所述CD3 McAb的使用浓度为100ng/ml。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于上海柯莱逊生物技术有限公司，未经上海柯莱逊生物技术有限公司许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201210541658.4/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
