[发明专利]一种制备α1-抗胰蛋白酶的方法

权利要求书

1.一种制备α1-抗胰蛋白酶的方法，其特征在于：它包括如下步骤：

a.沉淀溶解：采用低温乙醇法中的改良K-N法组份Ⅳ沉淀溶解于8-12倍体积的pH8.1-9.0的缓冲液中，常温分散搅拌1小时，30-40℃加热搅拌1小时，常温搅拌4-14小时，得溶解液；

b.PEG沉淀：将a步骤溶解液冷至5℃，加入PEG3000-6000，PEG浓度为6-10%（g/ml），搅拌1小时，用酸调整pH值至5.05-5.35，加入1.0-2.0%助滤剂，搅拌过滤得到滤液，滤液用碱调到pH7.0；

c.病毒灭活：用S/D法灭活；

d.纯化：采用阴离子交换层析纯化；

e.超滤；

f.纯化：采用阳离子交换层析纯化；

g.超滤透析；

h.15nm纳米过滤；

i.除菌分装,冻干。

2.一种制备α1-抗胰蛋白酶的方法，其特征在于：它包括如下步骤：

a.沉淀溶解：采用低温乙醇法中的改良K-N法组份Ⅳ沉淀溶解于8-12倍体积的pH8.1-9.0的缓冲液中，常温分散搅拌1小时，30-40℃加热搅拌1小时，常温搅拌4-14小时，得溶解液，弃去沉淀，在上清液中加入2-3%助滤剂，边搅拌边进行压滤得滤液，超滤浓缩至约滤液体积的1/6-1/7，浓缩后蛋白浓度控制在5.1-6.0%得超滤浓缩液；

b.PEG沉淀：将a步骤的超滤浓缩液冷至5℃，加入PEG3000-6000，PEG浓度为6-10%（g/ml），搅拌1小时，用酸调整pH值至5.05-5.35，加入1.0-2.0%助滤剂，搅拌过滤得到滤液，滤液用碱调到pH7.0；

c.病毒灭活：用S/D法灭活；

d.纯化：采用阴离子交换层析纯化；

e.超滤；

f.纯化：采用阳离子交换层析纯化；

g.超滤透析；

h.15nm纳米过滤；

i.除菌分装,冻干。

3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于：c步骤所述S/D病毒灭活为采用1％Tween80/0.3%TNBP，在24±1℃，6小时，灭活后用等体积缓冲液进行稀释终止来保存α1-抗胰蛋白酶的生物活性。

4.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于：d步骤所述的纯化：阴离子交换层析采用的树脂为DEAE-Sepharose Fast Flow、DEAE-Sepharose CL-6B，DEAE-Sephacel或者Q--Sepharose Fast Flow；平衡层析柱缓冲液，采用0.02-0.03M PBS溶液，pH6.45-6.65，洗脱缓冲液0.075-0.085M PBS溶液，pH6.45-6.65。

5.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于：f步骤所述的纯化：阳离子交换采用的树脂为：CM-Sepharose Fast Flow层析、CM-SepharoseCL-6B，SP-Sepharose Fast Flow层析；平衡层析柱缓冲液采用0.003M磷酸氢二钠+0.003M枸橼酸钠，pH5.36-5.44。

6.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于：步骤b所述的助滤剂为硅藻土。

7.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于：步骤b所述的PEG为PEG4000。