[发明专利]一种用量子点荧光免疫层析试纸条检测的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种用量子点荧光免疫层析试纸条检测的方法，属于免疫检测领域。

背景技术

免疫层析试纸条检测也称为免疫侧向层析，是一种快速、简便、灵敏、直观、价格低廉，并可进行现场检测的方法。具有放射性免疫、酶联免疫吸附法、气相色谱法、液相色谱法、毛细管电泳等仪器检测方法所不具备的优点，在检测技术中处于重要地位，是对传统和大型仪器检测方法的有力补充。随着社会的发展，人类对生活质量有了更高的要求，免疫层析检测技术在面对人类疾病、环境污染物、食品安全、动物医学等重大问题时具有重要的作用。

当前免疫层析产品主要是基于胶体金技术而开发的，在医学检验、毒品检测、食品安全检测等领域得到了广泛的应用。但该技术由于存在颗粒粒径均一性差、免疫标记物不稳定、颜色单一只能单指标检测、无法实现准确定量检测、灵敏度不高等不足，无法满足人们的需求。因此发明高灵敏度、多指标同时检测、简便、直观、价格低廉的免疫层析检测方法十分必要。

量子点是一种在光源激发下发射出明亮荧光的半导体纳米晶粒。具有以下特点：

1、粒径不同，发光颜色不同，并且可以用单一光源激发多种不同颜色的量子点；

2、量子点的发射谱狭窄对称，同时激发的多种量子点不易出现重叠，使多重分子同时检测容易实现；

3、量子点的量子产率高、荧光强，可以接受长时间反复激发，光化学稳定性好，不易猝灭。

由于量子点具有以上优良特性，使其可能成为分子检测和医学诊断的有力工具，经过近20多年的发展，逐步从细胞、组织标记成像、细胞示踪、活体成像等应用研究开始向临床检测、疾病控制、食品安全检测等领域方向发展。但目前各种现有的涉及量子点的免疫层析试纸条检测方法，或者由于选用的为核型量子点、水相合成的量子点或者量子点包裹微球等，或者由于采取固化方法将其固定在结合区，而影响了检测灵敏度的提高并造成精密度差。

发明内容

为克服现有技术中的不足，本发明提供了一种用量子点荧光免疫层析试纸条检测的方法，该方法是一种高灵敏度、多指标同时检测、简便、直观、价格低廉、应用广泛的量子点荧光免疫层析试纸条快速检测方法。

实现上述目的的技术方案为一种用量子点荧光免疫层析试纸条检测的方法，具体采用如下步骤：

（1）. 量子点标记蛋白液的制备：取浓度为1μM-10μM的0.2-2nmol羧基水溶性CdSe/ZnS量子点平衡至室温，并用超声波处理；将量子点、EDC、蛋白均用20mM~200mM 、pH6.0~7.4的磷酸盐溶液或硼酸盐溶液溶解；按照1μmol~5μmol EDC/2nmol量子点的比例加入EDC，EDC即碳二亚胺盐酸盐，涡旋振荡混匀，再按1nmol~100nmol 蛋白/1nmol量子点的比例加入浓度为1~10mg/mL的蛋白，涡旋混匀，室温搅拌反应1-4小时；反应结束后用截留分子量为10kDa-100kDa的离心超滤管超滤浓缩至20-100μL，然后采取凝胶尺寸排阻色谱法进行纯化，收集有荧光的部分，再用离心超滤管浓缩至量子点浓度为0.2-2μmol/L，保存于10mM-100mM、 pH为7.4~9.0的、含有质量百分比浓度为0.05%的NaN₃的硼酸盐缓冲液中，2~8℃冰箱保存备用； 

（2）. 量子点标记蛋白检测液的制备：将上述量子点标记蛋白液取出放置至室温，用PBS-TBN稀释100-1000倍成量子点标记蛋白检测液，PBS-TBN为含20mM-150mM氯化钠NaCl、0.02%-0.1% 吐温Tween-20、2mg/mL-10m/mL 牛血清白蛋白BSA、0.05% 叠氮化钠NaN₃的10mM-100mM磷酸盐缓冲液PB，然后置于2~8℃冰箱保存备用；