[发明专利]一种卷曲霉素的制备方法

权利要求书

1.一种固相合成卷曲霉素的方法，包括：

(1)使Fmoc-Ser(tBu)-OH或Fmoc-Ala-OH在有机碱的存在下于溶剂中与树脂反应，生成Fmoc-Ser(tBu)-树脂或Fmoc-Ala-树脂；

(2)在脱Fmoc保护剂的存在下使Fmoc-Ser(tBu)-树脂或Fmoc-Ala-树脂脱除Fmoc，然后使其在偶联剂体系的存在下于溶剂中与Boc-L-Dap(Fmoc)-OH偶联，重复上述脱除Fmoc和偶联步骤，依次偶联Fmoc-卷须酶啶(Pbf)-OH、Fmoc-β-酰脲脱氢丙氨酸和Fmoc-Dap(All oc)-OH，然后使反应混合物在脱Alloc保护剂的存在下于溶剂中反应，之后使其产物在偶联剂体系的存在下与Boc-β-Lys(Boc)-OH偶联，并用脱Fmoc保护剂脱除Fmoc，得到线性全保护肽树脂；

(3)在裂解剂的存在下于溶剂中使线性全保护肽与树脂分离；

(4)在偶联剂体系的存在下于溶剂中使线性全保护肽成环；

(5)在脱保护剂的存在下于溶剂中使成环的全保护肽脱除tBu、Boc和Pbf保护基。

2.权利要求1的方法，其中(1)中所述树脂为2-CTC树脂，氨基酸反应前，所述树脂的替代度为0.03-1.8mmol/g，优选0.05-1.5mmol/g，更优选0.08-1.2mmol/g；与氨基酸反应后，所述树脂的替代度为0.03-1.2mmol/g，优选0.05-1mmol/g，更优选0.08-0.85mmol/g。

3.权利要求1或2的方法，其中(2)中所述脱Fmoc保护剂是体积浓度为5-90体积%，优选10-70体积%，更优选15-50体积%的哌啶/DMF溶液。

4.权利要求1或2的方法，其中(2)中所述脱Alloc保护剂为四三苯基磷钯/一苯基硅烷体系，其中，基于树脂上所负载的氨基酸的摩尔量计，四三苯基磷钯的用量为0.1-1当量，优选0.3-0.8当量，更优选0.5-0.7当量，一苯基硅烷的用量为5-15当量，优选6-13当量，更优选8-12当量。

5.权利要求1或2的方法，其中(5)中所述脱保护剂是体积比为85-90:1-5:1-5:1-5的TFA:苯甲硫醚:苯甲醚:EDT混合物，基于步骤(4)的固体产物重量计，其用量为3-30ml/g固体，优选2-20ml/g固体，更优选5-15ml/g固体。

6.权利要求1或2的方法，其中所述偶联剂体系为A+B+C或A+C，其中A为HOBt或HOAt，B为PyBOP、PyAOP、HATU、HBTU或TBTU，C为DIPEA、DIC或DIPCID，优选DIPEA+HOBt+PyBOP或HOBt+DIC体系，其中基于树脂上所负载的氨基酸的摩尔量计，A或B的用量各自为0.5-5当量，优选1.5-4当量，更优选2-3.5当量，C的用量各自为1-10当量，优选3-8当量，更优选4-7当量。

7.权利要求1或2的方法，其中(3)中所述裂解剂为有机酸溶液，其中所述有机酸为TFE或TFA，所述有机酸溶液所用的溶剂为步骤(1)中所用的溶剂，优选DCM和/或DMF，所述有机酸在该溶液中的体积浓度为10-40体积%，优选15-35体积%，更优选18-25体积%；其用量为3-20ml/g树脂，优选5-15ml/g树脂，更优选8-12ml/g树脂。

8.权利要求1或2的方法，其中的反应在气体、优选惰性气体的搅拌下进行。

9.权利要求1或2的方法，其中(1)中所述有机碱为TEA、TMP、DMAP、DIPEA等及其混合物，优选DIPEA或DMAP。

10.权利要求1或2的方法，其进一步包括采用HPLC对最终产品进行纯化。