[发明专利]一种卷曲霉素的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种卷曲霉素的制备方法，具体而言，涉及一种固相合成卷曲霉素的方法。

背景技术

卷曲霉素是1960年从链霉菌St r.capreolus中分离得到的碱性环状多肽，卷曲霉素包括IA、IB、IIA和IIB等，临床应用的主要是IA和IB，而IIA和IIB属于其副组分。卷曲霉素对结核分支杆菌和部分非结核分支杆菌（如堪萨斯分支杆菌）具有抑菌作用，其最低抑菌浓度（MIC）约为10μg/ml，易达到较高的血浓度，可用于治疗其致病菌对其他低毒性药物有抗性的结核病患者。

目前卷曲霉素主要通过生物合成，该方法不可避免的会产生卷曲霉素IIA或IIB两种副产物，使得分离纯化比较困难。

发明内容

为了选择性地合成卷曲霉素IA或IB，本发明提供了一种固相合成卷曲霉素的方法，包括：

(1)使Fmoc-Ser(tBu)-OH或Fmoc-Ala-OH在有机碱的存在下于溶剂中与树脂反应，生成Fmoc-Ser(tBu)-树脂或Fmoc-Ala-树脂；

(2)在脱Fmoc保护剂的存在下使Fmoc-Ser(tBu)-树脂或Fmoc-Ala-树脂脱除Fmoc，然后使其在偶联剂体系的存在下于溶剂中与Boc-L-Dap(Fmoc)-OH偶联，重复上述脱除Fmoc和偶联步骤，依次偶联Fmoc-卷须酶啶(Pbf)-OH、Fmoc-β-酰脲脱氢丙氨酸和Fmoc-Dap(All oc)-OH，然后使反应混合物在脱Alloc保护剂的存在下于溶剂中反应，之后使其产物在偶联剂体系的存在下与Boc-β-Lys(Boc)-OH偶联，并用脱Fmoc保护剂脱除Fmoc，得到线性全保护肽树脂；

(3)在裂解剂的存在下于溶剂中使线性全保护肽与树脂分离；

(4)在偶联剂体系的存在下于溶剂中使线性全保护肽成环；

(5)在脱保护剂的存在下于溶剂中使成环的全保护肽脱除tBu、Boc和Pbf保护基。

本发明通过固相合成，在特定Dap的氨基上进行β-赖氨酰基化，从而选择性地合成了卷曲霉素IA或IB，避免了IIA和IIB的产生。

具体实施方式

本文中，“替代度”指的是单位量的树脂负载的物质的数量，单位为“mmol/g”。

本文中，“适量”表示所修饰的物质的用量对反应而言不是关键的，只要能达到所需目的即可，无需限于一个具体范围，而且还可以一次添加或分多次添加，本领域技术人员可以根据经验结合实际情况进行选择，例如通过检测反应终点来控制用量。

本文中，“适当时间”表示所修饰的时间对反应而言不是关键的，只要能达到所需目的即可，无需限于一个具体范围，本领域技术人员可以根据经验结合实际情况进行选择，例如通过检测反应终点来控制时间。

本文中，如无相反说明，则所述反应在常温常压下进行。

本发明中的宽泛的、优选的、更优选的、和最优选的定义和范围可以相互组合。

本文中出现的缩写所表示的中文含义列举在表1中。

表1.文中的缩写

本发明提供一种固相合成卷曲霉素的方法，包括：

(1)使Fmoc-Ser(tBu)-OH或Fmoc-Ala-OH在有机碱的存在下于溶剂中与树脂反应，生成Fmoc-Ser(tBu)-树脂或Fmoc-Ala-树脂；

(2)在脱Fmoc保护剂的存在下使Fmoc-Ser(tBu)-树脂或Fmoc-Ala-树脂脱除Fmoc，然后使其在偶联剂体系的存在下于溶剂中与Boc-L-Dap(Fmoc)-OH偶联，重复上述脱除Fmoc和偶联步骤，依次偶联Fmoc-卷须酶啶(Pbf)-OH、Fmoc-β-酰脲脱氢丙氨酸和Fmoc-Dap(All oc)-OH，然后使反应混合物在脱Alloc保护剂的存在下于溶剂中反应，之后使其产物在偶联剂体系的存在下与Boc-β-Lys(Boc)-OH偶联，并用脱Fmoc保护剂脱除Fmoc，得到线性全保护肽树脂；

(3)在裂解剂的存在下于溶剂中使线性全保护肽与树脂分离；

(4)在偶联剂体系的存在下于溶剂中使线性全保护肽成环；

(5)在脱保护剂的存在下于溶剂中使成环的全保护肽脱除tBu、Boc和Pbf保护基。

步骤(1)：