[发明专利]一种抗BP180 NC16A IgE抗体的酶联免疫检测试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种抗BP180NC16A IgE抗体的酶联免疫检测试剂盒，包括检测试剂，其特征在于，所述检测试剂的制备方法包括以下步骤：

步骤11：向E.coli DH5α感受态细胞悬液中加入重组质粒pGEX-2T抗BP180NC16A的DNA，表达抗BP180 NC16A蛋白；

步骤12：对所述抗BP180 NC16A蛋白进行提纯，得到纯化的抗BP180 NC16A蛋白；

步骤13：对所述纯化的抗BP180 NC16A蛋白进行浓缩，得到浓缩的抗BP180 NC16A蛋白；

步骤14：向所述浓缩的抗BP180 NC16A蛋白中加入PBS，使其稀释至500μg/mL，得到抗原包被液；

步骤15：对所述抗原包被液进行包被后封闭，得到所述检测试剂。

2.一种抗BP180 NC16A IgE抗体的酶联免疫检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤21：向权利要求1所述的试剂盒的反应孔中加入反应样本，在30℃恒温条件下一抗孵育，2h后用PBST第Ⅰ次洗板；

步骤21’：用BSA封闭液将HRP标记的IgE抗体原液稀释1000倍，得到二抗稀释液；

步骤22：向经过第Ⅰ次洗板的试剂盒的反应孔中加入所述二抗稀释液，在30℃恒温条件下二抗孵育，1h后用PBST第Ⅱ次洗板；

步骤23：向经过第Ⅱ次洗板的试剂盒的反应孔中加入显色液，在30℃恒温条件下显色，得到样本试剂盒；

按照步骤21、步骤21’、步骤22、步骤23，同时得到待测样本试剂盒和至少3个阴性对照样本试剂盒；

步骤24：显色终止后以酶标仪分别读取待测样本试剂盒和阴性对照样本试剂盒在波长为450nm、参考波长为620nm处的吸光度，若待测样本的吸光度＞阴性对照样本吸光度均值+2SD，则检测结果为阳性，若待测样本吸光度＜阴性对照样本吸光度均值+2SD，则检测结果为阴性。

3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述待测样本为经过PBS以1∶10稀释的血清或者水疱。