[发明专利]一种抗BP180 NC16A IgE抗体的酶联免疫检测试剂盒及检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及IgE检测方法技术领域，特别涉及一种抗BP180NC16A IgE抗体的酶联免疫检测试剂盒及检测方法。 

背景技术

现有技术中，对抗BP180 NC16A IgE抗体进行检测时，受到标本采集途径，抗原包被浓度，标本稀释浓度，二抗稀释液浓度和反应温度等条件的限制，不仅灵敏度较低，而且，正确性无法得到保障。 

发明内容

为了解决上述问题，本发明提出了一种灵敏度高且具有特异性的种抗BP180NC16A IgE抗体的酶联免疫检测试剂盒及检测方法。 

本发明提供的抗BP180 NC16A IgE抗体的酶联免疫检测试剂盒，包括检测试剂，所述检测试剂的制备方法包括以下步骤： 

步骤11：向E.coli DH5α感受态细胞悬液中加入重组质粒pGEX-2T抗BP180NC16A的DNA，表达抗BP180 NC16A蛋白； 

步骤12：对所述抗BP180 NC16A蛋白进行提纯，得到纯化的抗BP180 NC16A蛋白； 

步骤13：对所述纯化的抗BP180 NC16A蛋白进行浓缩，得到浓缩的抗BP180  NC16A蛋白； 

步骤14：向所述浓缩的抗BP180 NC16A蛋白中加入PBS，使其稀释至500μg/mL，得到抗原包被液； 

步骤15：对所述抗原包被液进行包被后封闭，得到所述检测试剂。 

本发明提供的抗BP180 NC16A IgE抗体的酶联免疫检测方法包括以下步骤： 

步骤21：向权利要求1所述的试剂盒的反应孔中加入反应样本，在30℃恒温条件下一抗孵育，2h后用PBST第Ⅰ次洗板； 

步骤21’：用BSA封闭液将HRP标记的IgE抗体原液稀释1000倍，得到二抗稀释液； 

步骤22：向经过第Ⅰ次洗板的试剂盒的反应孔中加入所述二抗稀释液，在30℃恒温条件下二抗孵育，1h后用PBST第Ⅱ次洗板； 

步骤23：向经过第Ⅱ次洗板的试剂盒的反应孔中加入显色液，在30℃恒温条件下显色，得到样本试剂盒； 

按照步骤21、步骤21’、步骤22、步骤23，同时得到待测样本试剂盒和至少3个阴性对照样本试剂盒； 

步骤24：显色终止后以酶标仪分别读取待测样本试剂盒和阴性对照样本试剂盒在波长为450nm、参考波长为620nm处的吸光度，若待测样本的吸光度＞阴性对照样本吸光度均值+2SD，则检测结果为阳性，若待测样本吸光度＜阴性对照样本吸光度均值+2SD，则检测结果为阴性。 

作为优选，所述待测样本为经过PBS以1∶10稀释的血清或者水疱。 

本发提供的抗BP180 NC16A IgE抗体的酶联免疫检测试剂盒及检测方法的有益效果在于，灵敏度高且具有特异性。 

具体实施方式

为了深入了解本发明，下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。 

本发明提供的抗BP180 NC16A IgE抗体的酶联免疫检测试剂盒包括检测试剂，检测试剂的制备方法包括以下步骤： 

步骤11：向E.coli DH5α感受态细胞悬液中加入重组质粒pGEX-2T抗BP180NC16A的DNA，表达抗BP180NC16A蛋白。其中，将该重组质粒pGEX-2T导入到E.coli DH5α感受态细胞的菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址是北京市朝阳区北辰西路1号院中科院微生物研究所，保藏日期为2012年12月11日，保藏编号为CGMCC No.6976，其分类命名的中文为大肠埃希氏菌，拉丁文为Escherichia coli。 

步骤12：对抗BP180 NC16A蛋白进行提纯，得到纯化的抗BP180 NC16A蛋白。 

步骤13：对纯化的抗BP180 NC16A蛋白进行浓缩，得到浓缩的抗BP180 NC16A蛋白。 

步骤14：向浓缩的抗BP180 NC16A蛋白中加入PBS，使其稀释至500μg/mL，得到抗原包被液。 

步骤15：对抗原包被液进行包被后封闭，得到检测试剂。 

本发明提供的抗BP180 NC16A IgE抗体的酶联免疫检测方法包括以下步骤： 

步骤21：向权利要求1的试剂盒的反应孔中加入反应样本，在30℃恒温条件下一抗孵育，2h后用PBST第Ⅰ次洗板； 

步骤21’：用BSA封闭液将HRP标记的IgE抗体原液稀释1000倍，得到二抗稀释液；