[发明专利]一种适应玉米淀粉污水做培养基碳源的枯草芽孢杆菌筛选和可湿粉剂的生产方法

说明书

技术领域

本发明属于枯草芽孢杆菌菌种筛选和培养的技术领域，尤其涉及用玉米淀粉污水培养枯草芽孢杆菌的方法。 

背景技术

微生态制剂是利用正常微生物成员和促进物质制成的微生物制剂，其具有补充或充实微生态系群落的内涵，维持或调整微生态平衡的作用。作为一种天然的生物活菌及生物活性物质，因具有无毒副作用、无留污染及不产生抗药性等优点而成为抗生素的替代品，并且越来越被人们所重视。微生态制剂与其他药物不同，能起到“已病辅治、未病防病、无病保健”重要作用。 

我国农业部早在2003年就公布了能够用于生产微生态制剂的芽孢杆菌属菌种有枯草芽孢杆菌（ Bacillussubtilis ）、地衣芽孢杆菌（ Bacilluslicheniformis ）等 。 

由枯草芽孢杆菌制备而成的微生态制剂具有如下优良特性：1)能调节动物肠道菌群平衡，改善肠道微生态环境，促进动物生长和提高抗病力。2)在不利环境条件下能以孢子形式存在，在饲料制粒、贮存及胃酸环境中仍能保持高活性。3)能刺激动物免疫器官的生长发育，激活淋巴细胞，提高免疫球蛋白和抗体水平，增强细胞免疫和体液免疫功能，提高机体免疫力。4) 能自身合成消化性酶类，如蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶和纤维素酶等，与内源消化酶共同发挥作用，促进养分的消化吸收。5）能自身合成抗生素，抑制有害菌生长。 

传统的枯草芽孢杆菌生产方法都要消耗大量的成品糖和淀粉等价格较高的工业产品，生产成本高。 

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，筛选一种适应玉米淀粉污水做培养基碳源的枯草芽孢杆菌菌株，以及用其培养枯草芽孢杆菌的新方法。不仅降低了生产成本，而且达到了环保的目的。该方法所产产品益生活力高、安全可靠、完全符合国家标准(医药级标准)。 

本发明提供的适应玉米淀粉污水做培养基碳源的枯草芽孢杆菌菌株为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）XWJLSP-1，已于2012年8月28日在中国微生物菌种保藏委员会普通微生物中心保藏，保藏号为CGMCC No.6478， 

保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

本发明所述枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）XWJLSP-1的筛选、培养方法如下： 

    1、筛选用培养基

   （ 1 ） 富集用液体培养基：玉米淀粉过程污水10-15%、玉米浆1-15%（w/w），NaCl 10.0g/L，碳酸钙粉10-50g/L，pH 值 7.0～7.2， 

   （ 2 ） 分离培养基： 富集用液体培养基中加入 2% 琼脂，    （ 3 ） 生理生化鉴定培养基： 参考 《 常见细菌鉴定手册 》 

   2、 菌株的培养、分离、鉴定方法 

  （1）土壤溶液的制备 

    从西王玉米淀粉厂污水排出口附近、下水道内和西王污水处理厂爆气池附近及污水处理厂内的草地、林地分别取了土样。把上述土样混合均匀后取10g 土壤， 放入盛 90mL 无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶中， 振摇约 20min, 使土样与水充分混合，使细胞分散，待用。

 （2）菌种的分离 

   取土壤溶液煮沸 10min～30in，然后取100 μL 加入富集用液体培养基中， 37 ℃、200r/min振荡培养15-20h。再取100μL富集后的培养液加入富集用液体培养基中，37 ℃、200r/min 振荡培养15-20h，这样反复做2-10次。把最后一次富集培养液进行10³-10⁹倍梯度稀释，用划线分离法在分离培养基上分离芽孢杆菌，选取疑似菌落纯化，斜面保藏，鉴定。

（ 3）菌种的鉴定 

    与同样条件培养的标准枯草芽孢杆菌菌株比较 ,选择菌落与标准枯草芽孢杆菌菌株干燥型菌落相近的菌株编号进行镜检，革兰氏染色实验，取杆状、产芽孢革兰氏阳性的菌落进行各项生化反应鉴定（参考《伯杰氏细菌鉴定手册 》和《微生物学实验手册 》和《常见细菌鉴定手册》进行），得到鉴定结果，列表对比。

试验项目          xwjlsp-1         xwjlsp-2      xwjlsp-3 

厌氧生长试验             -                      +                   -