[发明专利]一种三碘甲状腺原氨酸的纳米磁微粒化学发光测定试剂盒及其制备方法和检测方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种结合了免疫磁微粒分离技术和化学发光免疫分析技术的三碘甲状腺原氨酸（T3）的纳米磁微粒化学发光测定试剂盒及其制备方法和检测方法。

背景技术

三碘甲状腺原氨酸(3,5,3’-三碘甲状腺原氨酸，T3)是一种分子量为651的碘化酪氨酸，与甲状腺素(T3)一样是一种重要的甲状腺激素。T3、T3在循环中均有结合态和游离态两种形式，正常情况下两种形式之间保持着动态平衡。

T3的测定对诊断甲状腺机能紊乱和监测甲状腺机能低下非常有意义。对甲状腺机能亢进的病人来讲，大多数患者的总T3和总T3的水平是一致的。不过在某些病例中，甲状腺机能亢进仅仅是由于T3的产生增多引起的(T3型甲亢症)，因此在FT3（血清游离甲状腺素）正常的甲亢患者，建议检测T3，尤其对于FT3和TSH（促甲状腺激素）均正常的患者(一般患者常首先检测FT3和TSH)，更应进一步检测T3。

严重甲状腺机能减退患者的总T3水平通常偏低而中度甲状腺机能减退患者总T3水平可能正常。非甲状腺疾病的严重病人或是在术后，可见T3水平偏低而反T3的水平升高。新生儿及婴儿的T3水平一般较高，但在某些老年病例中T3水平也会偏低。

目前T3的检测方法目前全部采用免疫学方法。临床免疫检测技术是利用抗原抗体反应原理检测生物体内物质的技术，该技术的引入使临床化学检验发生了革命性的变化：检测项目不断增加，方法的灵敏度更高、特异性更强，自动化程度更高。自上世纪80年代以后，免疫学检测技术随着单克隆抗体、人工合成多肽、基因工程表达抗原及各种标记技术的成熟而迅速发展，放射免疫测定(RIA)和酶免疫测定(EIA)逐渐取代传统的免疫沉淀和免疫凝聚，使检测的敏感性、特异性都大大提高，随后化学发光技术的应用使免疫学检测的敏感性和线性范围得到进一步的提高。这些技术在临床检验中的应用为疾病的定量检测、疗效观察及病因探讨提供了更直接和客观的资料。

T3是目前医院开展的常规免疫检测项目，对甲状腺疾病的诊断有无可替代的重要参考价值。目前我国已批准上市的T3免疫检测试剂有进口和国产两大类，其中进口试剂有贝克曼等跨国定量检测公司的产品，采用的方法学多为化学发光，而国产试剂中采用的方法学多数为放免法，近两年开始出现化学发光类产品。

放免分析法存在线性范围窄、不易实现全自动化等方法学限制因素。而化学发光免疫分析法具有灵敏度高、检测线性范围宽、操作简便，自动化程度高等优势。目前化学发光免疫分析技术因其有上述诸多有点得到了广泛的应用。

然而，在实际的免疫检测中，由于待测样品中所含的杂质成分较多，一定程度上影响了检测灵敏度和准确性，所以从复杂的样品基质中快速分离、纯化出目的待测物，是临床检验工作者面临的难题之一。

磁微粒免疫检测技术是利用高分子材料合成一定粒度大小的磁性固相微粒作载体，以物理吸附、化学偶联等方法包被上具有特异性亲和力的抗体或抗原等各种免疫活性物质，具有分离速度快、效率高、可重复性好、操作简单、不影响被分离细胞或其他生物材料的生物学性状和功能等特点，在外加磁场作用下可定向运动，使得某些特殊成分得以分离、浓集或纯化。

中国发明专利公开C N101949944A公开了一种了三碘甲状腺原氨酸定量检测试剂盒及其制备方法，其中，试剂盒包括包被有二碘甲状腺原氨酸-明胶的磁微粒混悬液、三碘甲状腺原氨酸系列校准品、辣根过氧化物酶标记的三碘甲状腺原氨酸抗体、发光底物A液、发光底物B液及浓缩洗液。使用该专利公开的试剂盒成功利用了磁微粒免疫检测技术实现了对三碘甲状腺原氨酸的准确检测。然而，该试剂盒的制备成本和使用成本高，原因是，一方面，在进行包被有二碘甲状腺原氨酸-明胶的磁微粒混悬液的制备时，不仅过程复杂，而且直接将二碘甲状腺原氨酸-明胶包被于磁微粒上的包被率较低，导致较高的成本；另一方面，其采取辣根过氧化物酶标记的三碘甲状腺原氨酸抗体，该抗体的制备也是非常繁琐，且标记率低，限制其检测效果和导致成本增加。此外，试剂盒在制备工艺上所存在的不易控和稳定性较差的因素，除了导致如前所述的成本增加的问题外，还使得检测的批间差大，限制了检测方法的精密度。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种三碘甲状腺原氨酸的纳米磁微粒化学发光测定试剂盒，其能够以较低的成本制备得到，且能够实现三碘甲状腺原氨酸准确和高精确地定量测定。

本发明同时还提供一种三碘甲状腺原氨酸的纳米磁微粒化学发光测定试剂盒的制备方法，该方法工艺稳定，成本低，且所得试剂盒的精密度高。