[发明专利]几株高产蛋白酶芽孢杆菌株的配伍优化方法无效
| 申请号： | 201210550691.3 | 申请日： | 2012-12-18 |
| 公开（公告）号： | CN103865830A | 公开（公告）日： | 2014-06-18 |
| 发明（设计）人： | 张述智;夏伟;朱绍辉;张浩;王晓丽;徐权汗;李之详;许团辉 | 申请（专利权）人： | 青岛中仁药业有限公司 |
| 主分类号： | C12N1/20 | 分类号： | C12N1/20;C12R1/10;C12R1/125 |
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| 地址： | 266300 山东*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 高产 蛋白酶 芽孢 杆菌 配伍 优化 方法 | ||
1.一种几株高产蛋白酶芽孢杆菌株的配伍优化方法，其特征在于：包括以下步骤：
（1） 平板培养，分别取Pc和Pe株枯草芽孢杆菌及Ps地衣芽孢杆菌保存菌种，划线接种至脱脂奶粉平板培养基，分别于35℃培养48h后观察；
（2） 试管接种，取发育健壮、菌落典型的菌株接种10ml种子培养基，170r/min，35℃振荡培养24h，再将菌种液以体积分数1％接种于发酵培养基，170r/min，35℃振荡培养48h，12000r/min离心20min，收集上清液；
（3） 取步骤（2）3种菌液各1ml，13000r/min离心25min，取上清分别以1:1比例配伍后，再与豆粉培养液以1:4比例混合，同时分别取单独Pc、Pe、Ps菌株上清与豆粉培养液以1:4比例混合，置于25℃恒温培养箱，酶解6h，测定氨基酸的变化。
2.根据权利要求1所述的几株高产蛋白酶芽孢杆菌株的配伍优化方法，其特征在于：所述步骤（1）中脱脂奶粉平板培养基是在TS（50 mmol/L Tris-HCl，150 mmol/L NaCl，pH8.0）中加入1%琼脂糖和1%脱脂奶粉，0.06 MPa 高压灭菌10min，待温后倾注平板。
3.根据权利要求1所述的几株高产蛋白酶芽孢杆菌株的配伍优化方法，其特征在于：所述步骤（2）中种子培养基是由蛋白胨15g/L、酵母膏5g/L、酪素3g/L、氯化钠5g/L配制而成，pH为7.5。
4.根据权利要求1所述的几株高产蛋白酶芽孢杆菌株的配伍优化方法，其特征在于：所述步骤（2）中发酵培养基是由蛋白胨10g/L，牛肉膏3g/L，氯化钠5g/L配制而成，pH为7.5。
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