[发明专利]轮状病毒的环介导等温扩增检测引物组和检测方法

权利要求书

1.一种应用环介导等温扩增检测轮状病毒(rotavirus)的检测引物组，其特征在于，由下列引物组成：

上游外引物F3：5’-ACCACTCCTTAATGCACAA-3’；

下游外引物B3：5’-GCCATCCTTTGATTAAAAATAGCT-3’；

上游内引物FIP：5’-CCTCTCGCGTTGAGTTCGTAT-GGAATAAATCTTCCGATTACTGG-3’；

下游内引物BIP：5’-ATGTTTGTATTACCCAACTGAAGCA-AGAAAGTGTATCCTTCCATGAA-3’。

2.一种非疾病的诊断和治疗目的的轮状病毒的检测方法，其特征在于，对样品进行病毒RNA提取，再反转录成cDNA，然后通过环介导等温扩增的方法用权利要求1所述的检测引物组对cDNA进行选择性扩增，确认是否存在有扩增产物。

3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述的样品为医院的腹泻样品、水或食品。

4.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述的通过环介导等温扩增的方法用权利要求1所述的检测引物组对cDNA进行选择性扩增具体为：环介导等温扩增体系为体系总体积25μL，包括2.5μL 10×Thermopol反应缓冲液、0.4μL 10mmol/LdNTPs、0.5μL10μmol/L上游外引物F3、0.5μL 10μmol/L下游外引物B3、1μL 40μmol/L上游内引物FIP、1μL 40μmol/L下游内引物BIP、0.6μL100mmol/L MgSO₄、12.5μL 2mol/L甜菜碱、4μL灭菌双蒸水ddH₂O，1μL 8U/μL Bst DNA聚合酶和1μL cDNA，反应条件为在温度为65℃孵育60min。

5.根据权利要求2或3或4所述的检测方法，其特征在于，所述的确认是否存在有扩增产物是用荧光显色检测，具体是在终止反应的反应管中加入1μL 10% SYBR Green Ⅰ显色剂，10min后观察结果，如果颜色为黄色，则样品轮状病毒阴性，无轮状病毒，如果颜色为绿色，则样品轮状病毒阳性，含有轮状病毒。