[发明专利](S)-3-甲胺基-1-(2-噻吩基)-1-丙醇的生物制备方法

说明书

技术领域：

本发明属于生物制药和绿色化学领域，具体涉及一种(S)-3-甲胺基-1-(2-噻吩基)-1-丙醇的生物制备方法。

背景技术：

度洛西汀(Duloxetine)是一种低副作用的，能够有效治疗精神紊乱和代谢紊乱的药物(USpatent5,023,269)，合成度洛西汀的关键是获得含有手性中心的中间体(S)-3-甲胺基-1-(2-噻吩基)-1-丙醇(MMAA)，因此不对称还原3-甲胺基-1-(2-噻吩基)-1-丙酮(MMAK)得到该中间体是目前最有效、研究最多的方法之一。在实现该途径的化学还原法中，由于需要钌金属催化剂催化下，加入4.5MPa的氢气反应，其经济性、安全性和环境友好性并不能满足生产的需要(Tetrahedron Lett.1990,31:7101–7104)。利用扁桃酸作为拆分试剂的化学拆分法，由于得率低和经济性差等原因，也不能作为生产MMAA的主要生产方法(TetrahedronAsymm.2003,14:1631–1636)。因此，利用生物酶法还原MMAK得到MMAA，以其高效率和环境友好性就成为目前最有效的方法。

在生物还原法中，有利用Candida magnoliae重组还原酶催化该还原反应的实例，但是该方法催化剂加入量高，底物浓度过低，明显难以产业化(US patent2008/0220484A1)。

发明内容：

本发明所要解决的技术问题是提供一种改进的(S)-3-甲胺基-1-(2-噻吩基)-1-丙醇的生物制备方法。

为解决以上技术问题，本发明采用如下技术方案：

一种(S)-3-甲胺基-1-(2-噻吩基)-1-丙醇的生物制备方法，其以3-甲胺基-1-(2-噻吩基)-1-丙酮为底物，该底物在生物催化剂、辅因子和辅因子再生系统的存在下发生不对称还原反应生成(S)-3-甲胺基-1-(2-噻吩基)-1-丙醇，所述的生物催化剂为酮还原酶，所述的辅因子再生系统包括葡萄糖和葡萄糖脱氢酶，所述的不对称还原反应在pH为6-8的水相缓冲液中进行，在起始状态的反应体系中，所述的底物3-甲胺基-1-(2-噻吩基)-1-丙酮的浓度为100-150mg/mL，所述的酮还原酶与所述的底物3-甲胺基-1-(2-噻吩基)-1-丙酮的质量比为1-2%。

进一步地，在起始状态的反应体系中，辅因子：葡萄糖：葡糖糖脱氢酶：3-甲胺基-1-(2-噻吩基)-1-丙酮的质量比为0.0005-0.002：1.2-2：0.01-0.05：1。

进一步地，所述的辅因子为NAD/NADH或NADP/NADPH。

再进一步地，所述的辅因子为NADP/NADPH。

进一步地，所述的水相缓冲液为三乙醇胺缓冲溶液。

进一步地，所述的不对称还原反应在pH为7.0的水相缓冲液中进行。

进一步地，所述的不对称还原反应的pH值用氢氧化钠溶液、碳酸钠溶液或碳酸氢钠溶液调节。

进一步地，所述的制备方法的实施过程如下：在反应容器中依次加入底物3-甲胺基-1-(2-噻吩基)-1-丙酮、葡萄糖、所述的水相缓冲液，搅拌均匀，继续加入酮还原酶、葡萄糖脱氢酶和所述的辅因子，在25~45℃下，搅拌反应，利用HPLC检测反应进程，待转化率达90~99%时，结束反应。

本发明中的酮还原酶（苏州汉酶生物技术有限公司，KRED137）、葡萄糖脱氢酶（苏州汉酶生物技术有限公司，GDH102）均可商购获得。

本发明的有益效果在于:

本发明通过对工艺条件的优化，提高底物浓度，降低酶用量，从而降低了生产成本，实现了高效率的生物转化过程，适合产业化生产。

具体实施方式：

本发明的反应式如下：

下面的实施例可以使本专业的技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。

实施例一