[发明专利]一种分离纯化高纯度重组人血清白蛋白的层析方法有效
| 申请号： | 201210559390.7 | 申请日： | 2012-12-21 |
| 公开（公告）号： | CN103880947A | 公开（公告）日： | 2014-06-25 |
| 发明（设计）人： | 杨代常;施波;施倩妮;欧吉权;刘静茹 | 申请（专利权）人： | 武汉禾元生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/765 | 分类号： | C07K14/765;C07K1/20;C07K1/18 |
| 代理公司： | 北京律诚同业知识产权代理有限公司 11006 | 代理人： | 黄韧敏 |
| 地址： | 430079 湖北省*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 分离 纯化 纯度 重组 血清 白蛋白 层析 方法 | ||
1.一种分离纯化高纯度重组人血清白蛋白的层析方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)将重组人血清白蛋白粗提取物经阳离子交换层析，在缓冲液中加入乙醇以去除内毒素，得到初级产物I；
2)将初级产物I经阴离子交换层析，得到中级产物II；
3)将中级产物II经疏水层析，得到高纯度的重组人血清白蛋白目标物。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，其中所述阳离子交换层析的阳离子/疏水复合填料为Capto-MMC或Bestarose Diamond MMC。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，其中所述阴离子交换层析的阴离子/疏水复合填料为Capto-Adhere或Bestarose Diamond MMA。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，其中疏水层析的填料为PhenylSepharose HP、Phenyl Sepharose FF、Phenyl Bestarose HP或Phenyl Bestarose FF。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述缓冲液包括洗杂缓冲液、平衡缓冲液I和平衡缓冲液II；其中洗杂缓冲液含体积比为10-20％的无水乙醇，平衡缓冲液I含体积比为0-10％的无水乙醇，平衡缓冲液II含体积比为5-15％的无水乙醇。
6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述洗杂缓冲液含15％的无水乙醇，平衡缓冲液II含10％的无水乙醇。
7.如权利要求5所述的方法，其中洗杂缓冲液含有：无水乙酸钠2g/L，15％无水乙醇，用NaCl调节电导至83mS/cm，用乙酸调节pH至pH4.6-5.0。
8.如权利要求5所述的方法，其中平衡缓冲液I为：无水乙酸钠2g/L，NaCl15g/L，乙酸调至pH4.2-4.8。
9.如权利要求5所述的方法，其中平衡缓冲液II为：无水乙酸钠2g/L，NaCl15g/L，10％无水乙醇，乙酸调至pH4.2-4.8。
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