[发明专利]与黄瓜苦味性状相关的SNP标记及其应用

权利要求书

1.黄瓜Csa6G088690蛋白，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，或该序列经替换、缺失或添加一个或几个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。

2.编码权利要求1所述蛋白的基因，其核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。

3.含有权利要求2所述基因的载体。

4.含有权利要求2所述基因的转基因细胞系。

5.权利要求2所述的基因在葫芦素合成中的应用。

6.一种与黄瓜苦味性状相关的SNP标记，其特征在于，其位于编码黄瓜Csa6G088690蛋白的基因序列第1178bp处，此处碱基为G的黄瓜苦味，此处碱基为A的黄瓜不苦；所述编码黄瓜Csa6G088690蛋白的基因序列如SEQ ID No.2所示。

7.用于检测权利要求6所述与黄瓜苦味性状相关的SNP标记的引物对，其特征在于，包括正向引物F5’-GAAGATGAAAATAGTCGATATAGAT-3’和反向引物R5’-ATGATATGAATTGCTAGCTAGTTCT-3’。

8.权利要求6所述与黄瓜苦味性状相关的SNP标记在鉴定苦味黄瓜品种中的应用，其包括步骤：

1）提取待测黄瓜的基因组DNA；

2）以待测黄瓜的基因组DNA为模板，利用权利要求7所述引物对F和R，进行PCR扩增反应；

3）检测PCR扩增产物；

其中，步骤2）中PCR反应使用的扩增体系以20μl计为：10-20ng/μl模板DNA1μl，10pmol/μl引物F和R各1μl，10mmol/L dNTP mix 0.4μl，0.5U/μL Taq DNA聚合酶10×PCR反应缓冲液2μl，余量为水；

PCR反应条件为：94℃5分钟；94℃20秒，55℃20秒，72℃30秒，35个循环；72℃10分钟；

步骤3）中检测PCR扩增产物采用dCAPS法，具体为：用内切酶EcoR V对PCR扩增产物进行酶切，并对酶切产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，如果检测结果仅为一条208bp大小的条带，则待测黄瓜属于苦味黄瓜品种，检测结果为一条182bp大小的条带，则待测黄瓜属于普通品种。

9.含有权利要求7所述引物对的用于检测黄瓜苦味性状的试剂盒，所述试剂盒还包括dNTPs、Taq DNA聚合酶、Mg²⁺、PCR反应缓冲液、标准阳性模板中的一种或多种。

10.权利要求6所述与黄瓜苦味性状相关的SNP标记在黄瓜分子标记辅助育种中的应用。