[发明专利]短小芽孢杆菌的培养方法

说明书

 

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及短小芽孢杆菌的培养方法。

 

背景技术

短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)为芽孢杆菌属，菌体细杆状，一般为0.6—0.7μm×2.0—3.0μm，革兰氏阳性。B. pumilus存在半透明型和不透明型两种不同的菌落形态，对两种菌落分别进行传代，半透明菌落能产生半透明和不透明型菌落，且基本各占一半。而不透明菌落在传代过程中只产生少许的半透明菌落，且传至第4代时半透明型菌落消失。主要用于防治小麦根腐病和草莓灰霉病。通过培养短小芽孢杆菌可获得具有蛋白酶活力的菌液，而现有培养短小芽孢杆菌的方法所获得的菌液蛋白酶活力不高。

 

发明内容

为了克服现有技术领域存在的上述缺陷，本发明的目的在于，提供一种短小芽孢杆菌的培养方法，解决现有技术培养短小芽孢杆菌的方法所获得的菌液蛋白酶活力不高的问题。

本发明提供的短小芽孢杆菌的培养方法，包括以下步骤：

一、菌种活化，短小芽孢杆菌保存菌划线于平板培养基上，37℃培养24h；

二、菌种发酵培养，将活化后的菌种转接入10ml种子发酵培养基中，37℃培养48h；

三、将发酵培养好的菌种接种于1000ml三角瓶，37℃培养48h；

四、将在三角瓶培养好的菌种接种于10L种子发酵罐，37℃培养44h，转速为150r/min，通气量为0.4vvm。

    所述步骤一中平板培养基是由5g蛋白胨，1g酵母膏，0.1g磷酸高铁，20g琼脂，适量海水经121℃灭菌30min配置而成，pH 7.6；所述步骤二中种子发酵培养基或步骤三中三角瓶发酵培养基均是由5g蛋白胨，5g葡萄糖，0.1g Na₂HPO₄，0.1g CaCl₂，801ml吐温经121℃灭菌30min配置而成，pH 7.0；所述步骤四中所用培养基是由30 g葡萄糖，50 g蛋白胨，10g干酪素，1g KH₂PO₄ ，0.2 g MgS0₄·7H₂O ，0.1 g CaCl₂·2H₂O 经121℃灭菌20min 配置而成，pH值为7.0。

本发明提供的短小芽孢杆菌的培养方法，其有益效果在于，通过本发明所培养的短小芽孢杆菌的蛋白酶活力非常高。

 

具体实施方式

下面结合一个实施例，对本发明提供的短小芽孢杆菌的培养方法进行详细的说明。

 

实施例

本实施例的短小芽孢杆菌的培养方法，包括以下步骤：

一、菌种活化，短小芽孢杆菌保存菌划线于平板培养基上，37℃培养24h；

二、菌种发酵培养，将活化后的菌种转接入10ml种子发酵培养基中，37℃培养48h；

三、将发酵培养好的菌种接种于1000ml三角瓶，37℃培养48h；

四、将在三角瓶培养好的菌种接种于10L种子发酵罐，37℃培养44h，转速为150r/min，通气量为0.4vvm。

所述步骤一中平板培养基是由5g蛋白胨，1g酵母膏，0.1g磷酸高铁，20g琼脂，适量海水经121℃灭菌30min配置而成，pH 7.6；所述步骤二中种子发酵培养基或步骤三中三角瓶发酵培养基均是由5g蛋白胨，5g葡萄糖，0.1g Na₂HPO₄，0.1g CaCl₂，801ml吐温经121℃灭菌30min配置而成，pH 7.0；所述步骤四中所用培养基是由30 g葡萄糖，50 g蛋白胨，10g干酪素，1g KH₂PO₄ ，0.2 g MgS0₄·7H₂O ，0.1 g CaCl₂·2H₂O 经121℃灭菌20min 配置而成，pH值为7.0。

经蛋白酶活力检测，短小芽孢杆菌的酶活力高达8000U/mL。