[发明专利]一种用于眼表重建的羊膜脂质体及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种生物粘附滴眼剂，具体涉及一种用于眼表重建的羊膜脂质体及其制备方法和应用。属于生物医药领域。

背景技术

羊膜是胎膜的最内层，由无血管和淋巴管的基质、基底膜及单层立方上皮细胞组成。羊膜内含有大量生物活性成分，主要包括各种胶原及层粘连蛋白。此外，还在羊膜中发现多种生长因子及大量的酶类，如表皮生长因子，碱性成纤维生长因子，神经营养因子，基质金属蛋白酶及其他生物活性酶。因此，羊膜具有促进角膜上皮化，抑制炎症和新生血管，减轻纤维化，减少瘢痕形成的作用。羊膜移植术在临床中被广泛应用于急性化学伤和热烧伤，角膜溃疡，翼状胬肉，结膜缺损及瘢痕形成等疾病的眼表重建的治疗中。

羊膜移植手术需要用9～10-0缝线将羊膜紧密缝合贴附于眼表，该手术是一种有创操作，由于缝针的破坏作用及缝线的刺激作用，存在一定的手术风险及并发症：手术可造成健康部位的组织创伤，缝线刺激引起瘢痕形成，羊膜溶解生化作用效果无法持久，重症化学伤植床受限无法进行移植手术，手术后感染，半透膜遮盖视区影响视力，外观发乌不美观，缝线刺激引起流泪，无法睁眼等。而且商品化羊膜费用昂贵，患者的手术依从性较差。因此，羊膜治疗需要寻找一种无创长效的治疗手段。

刘祖国等发明了一种羊膜提取液（200410027760.8）：取剖腹产胎盘，清洗后分离羊膜，液氮研磨后，按重量体积比1：5-10加入医用生理盐水，匀浆，得匀浆液；匀浆液在0-4℃放置1-7天，在100-120℃加热30-60分钟，过滤，取滤液；调节滤液pH值到3，静置，过滤，取滤液；调节滤液pH值至7.2，无菌条件下0.20-0.22um滤膜过滤，取滤液，即为羊膜提取液，0-4℃保存。于永斌等发明了一种治疗角膜碱烧伤的羊膜滴眼液（200910178422.7）：处方为每100ml注射用水中，包括海藻糖1-2g，玻璃酸或其盐0.5-1.5g，肝素或其盐4000-6000单位，氯化钠0.3-0.9g,苯扎溴铵0.001-0.003g,维生素E0.05-0.15g，羊膜匀浆上清液1-3ul。

这些眼用制剂在一定程度上避免了羊膜移植的弊端，但这些药物剂型有些不足：1.较低的眼部生物利用度。2.局部给药后一过性药物峰浓度，药效维持时间短。3.由于眼球运动和鼻泪管系统的体循环吸收作用，可引起全身不良反应而且使大量的药物损失。4局部眼组织药物传递效率较低。5羊膜活性成分被结膜囊内酶降解。给药后起始阶段泪液中药物浓度较高而后便迅速下降的现象不但容易造成潜在的毒性风险，还必须频繁给药。为了克服上述不足，开发新型羊膜眼部药物传递系统显得非常必要。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于眼表重建的羊膜脂质体及其制备方法和应用，本发明的制备方法简便合理，且制备得到的羊膜脂质体疗效显著，缓释长效，眼部刺激性小适于临床推广应用。

为了达到以上目的，本发明所采用的技术方案为：

首先，本发明提出了一种用于眼表重建的羊膜脂质体的制备方法，其特征在于是由磷脂，胆固醇，乙醚以及羊膜活性液按照以下步骤制备得到：

将磷脂和胆固醇的混合物置于圆底烧瓶中，用乙醚溶解，在旋转蒸发仪上减压蒸发除去乙醚，使在内壁上形成一薄膜，加入羊膜活性液，加玻璃珠数枚，振摇搅拌，使贴壁脂质膜完全溶脱，超声处理后，过滤灌封，即得。

在本发明中，优选的，所述的羊膜活性液按照以下步骤制备得到：

取病原学检测无病毒性肝炎，艾滋病，梅毒等传染性疾病的剖宫产的新鲜胎盘，在整流罩无菌条件下，用含有25-75μg/ml青霉素钠、25-75μg/ml硫酸链霉素、50-150μg/ml硫酸新霉素和1.5-4.0μg/ml二性霉素B的生理盐水溶液冲洗胎盘数次，直至除去血迹，将胎盘浸于上述溶液中用医用钳从绒毛膜中钝性分离出羊膜；分离之后，用医用刀片将羊膜切成碎片，按重量体积比1：5-10加入PBS液（浓度0.01mol/L，PH7.4），无菌条件下，研磨羊膜，匀浆机匀浆处理，用超声仪萃取多余的蛋白质；离心，取上清，加入维生素C及羟苯乙酯，混合即得。

其中，优选的，所述的生理盐水溶液中含有50μg/ml青霉素钠、50μg/ml硫酸链霉素、100μg/ml硫酸新霉素和2.5μg/ml二性霉素B。

其中，优选的，按重量体积比1：10加入PBS液.

其中，优选的，所述的匀浆是以8000r/min匀浆2分钟；所述的超声萃取是强度10w，超声10分钟；所述的离心是以6500r/min离心10分钟。