[发明专利]一种神经元分离和培养方法及试剂

权利要求书

1.一种神经元分离和培养方法，其包括以下步骤：

大脑皮质组织分离；

组织细胞捣碎后酶消化；以及

细胞原代培养；

其特征在于：在细胞原代培养步骤前含有筛网过滤并离心的步骤。

2.根据权利要求1所述的一种神经元分离和培养方法，其特征在于：所述大脑皮质组织分离步骤为：

将孕15-17天的大鼠颈椎脱臼致死，75%乙醇腹部消毒，剪刀剪开腹部至两侧，无菌条件下取出串珠状胚胎，放入盛有1×PBS的培养皿中，然后在无菌超净台内冰床上取胎鼠两侧大脑半球放入盛有1×PBS的培养皿中，用眼科镊夹取动物双侧大脑皮质置于盛有1×PBS的培养皿内，仔细剥离并去除皮层血管组织和软脑膜，再将大脑皮质移至另一个盛有1×PBS的培养皿内。

3.根据权利要求1所述的一种神经元分离和培养方法，其特征在于：所述组织细胞捣碎后酶消化步骤为：

无菌条件下，用眼科镊夹碎脑组织呈糜状，加入浓度0.1-0.125%胰酶2ml，37℃培养箱消化10分钟；用神经元培养首液终止消化后，继续加入神经元培养首液轻轻吹打，直至将组织全部吹散，形成细胞悬液。

4.根据权利要求1所述的一种神经元分离和培养方法，其特征在于：所述筛网过滤离心步骤中采用的筛网或微孔滤网孔径为200目。

5.根据权利要求1所述的一种神经元分离和培养方法，其特征在于：所述细胞原代培养步骤为：将已离心的上清液弃去，用神经元培养首液重悬离心沉淀后，接种于多孔培养板内，置培养箱中进行培养，6-24小时后换液改用神经元培养维持液，以后每1-4天换维持液1次，每次半量或全量换液。

6.根据权利要求5所述的一种神经元分离和培养方法，其特征在于：接种用的所述多孔培养板采用多聚赖氨酸或者胶原预先包被。

7.根据权利要求1所述的一种神经元分离和培养方法，其特征在于：在原代细胞培养步骤后，还含有神经元鉴定的步骤；神经元鉴定的步骤采用Tuj1抗体和DAPI鉴定神经元。

8.一种用于权利要求1所述的一种神经元分离和培养方法的神经元培养首液，其特征在于其配方为：胎牛血清10%，200μM L-谷氨酰胺 1%，双抗1%，Neurobasal 88%。

9.一种用于权利要求1所述的一种神经元分离和培养方法的神经元培养维持液，其特征在于其配方为：200μM L-谷氨酰胺1%，双抗1%，B27 2%，Neurobasal 96%。