[发明专利]一种水产弧菌快速药敏检测试剂盒

权利要求书

1.一种水产弧菌快速药敏检测试剂盒，包括有检测板、菌体采集工具、增菌液、药敏检测培养基、比浊管、接种滴管及比色卡；其中检测板包含有用于药敏检测的、包被了含有不同浓度药物和显色指示剂的检测孔，所述显色指示剂为阿尔玛蓝。

2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于所述的菌体采集工具为无菌接种环或无菌吸管。

3.用于权利要求1所述的试剂盒的增菌液，其组份及浓度如下：牛肉浸粉6 g/L、可溶性淀粉1.5 g/L、酪蛋白水解物17.5g/L、NaCl 15g/L、CaCl₂2.8 mg/L、MgCl₂ 4 mg/L、鱼肉蛋白胨10g/L。

4.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于所述的药敏检测培养基的组成如下：牛肉浸粉6 g、可溶性淀粉1.5 g、酪蛋白水解物17.5 g、NaCl 15g、2.8 mg CaCl₂、4 mg MgCl₂、蒸馏水1 L。

5.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于所述的包被了含有药物的显色指示剂的检测孔，是将溶解有药物的海藻糖水溶液与显色指示剂阿尔玛蓝混合，加入到检测孔中进行阴干制成。

6.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于所述的检测板还包含有用做质量控制的检测孔和/或生长对照的检测孔。 

7.如权利要求6所述的试剂盒，其特征在于所述的质量控制的检测孔和生长对照的检测孔，是将海藻糖水溶液和显色指示剂阿尔玛蓝混合，加入到检测孔中进行阴干制成。

8.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于所述的检比色卡上划分有细菌增殖阳性对照区及细菌增殖阴性对照区,其中细菌增殖阴性对照区到细菌增殖阳性对照区的颜色从蓝色（RGB44、19、185）至粉红色（RGB：255，143，218）渐变。

9.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于所述的药物为氨苄青霉素、氟苯尼考、阿米卡星、四环素、土霉素、强力霉素、多粘菌素B、复方新诺明、诺氟沙星、恩诺沙星或利福平。

10.权利要求1所述的试剂盒进行检测的方法，包括如下的步骤：

1）利用无菌接种环挑取待检弧菌单个菌落，置于增菌液管内搅动均匀，然后将增菌液管置于28 ℃培养箱内震荡培养，直至增菌液浊度与0.5麦度比浊管的浊度相当；

2）将用增菌液扩大培养后的菌液以药敏检测培养基将其稀释1500倍，然后利用接种滴管分别滴加于药敏检测和生长对照的检测孔内，每孔滴加100μl菌液；而质量控制的检测孔内加入100μl无菌的药敏检测培养基；

3）将检测板置于28 ℃培养箱内避光培养6-10h，取出检测板观察微孔内的颜色，对照药敏比色卡进行药敏结果判读，判读标准如下：

A、若质控区颜色呈蓝色，则试验有效，可以继续进行判读；若呈粉红色，则试验无效，需重新进行检测；

B、若生长对照区呈粉色，则可以继续进行MIC判读；若生长对照区呈蓝色则需将检测板置于28℃培养箱内继续培养，至颜色变为粉红色后，再进行MIC判读；

C、若质控区呈蓝色，生长对照区呈粉红色，则判读各列不同药物对菌体的MIC，其中每列与比色卡上细菌增殖阴性对照区内颜色相同微孔的最低药物包被浓度即为待测弧菌的MIC。