[发明专利]一种水产弧菌快速药敏检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于水产致病微生物体外诊断技术领域，具体涉及一种水产弧菌快速药敏检测试剂盒。

背景技术

近年来随着水产养殖业的快速发展，水产养殖动物病害问题也日益突出，其中细菌性疾病已在世界范围内对渔业经济造成了巨大的损失。弧菌是一大群菌体短小、极生鞭毛、能运动、无芽胞的短杆状弯曲成弧形的革兰氏阴性菌，隶属于弧菌科、弧菌属。弧菌广泛分布于自然界，以水体中分布居多。大量研究表明，多种弧菌可引起海水养殖鱼类、贝类及甲壳类等经济动物的流行性和暴发性死亡，主要包括副溶血弧菌、灿烂弧菌、鳗弧菌、溶藻弧菌、哈维氏弧菌等。弧菌病给水产养殖业造成巨大经济损失，并且该病还会导致野生海水鱼类、贝类及甲壳类的死亡，进而威胁海洋自然生物资源。因此，对该疾病的预防与控制研究一直备受国内外研究人员的关注，是海水养殖动物病害的主要研究领域之一。目前，在水产养殖生产过程中，抗生素的使用仍是解决水产养殖动物弧菌病的重要手段，它能在短期起到良好的治疗效果，极大地降低养殖业的经济损失，但由于抗生素在疾病防治上的广泛和长期使用，耐药性弧菌的种类及数量得到不断攀升。近年来，抗药性弧菌菌株也不断地被分离到，在这种情况下如果无选择地盲目使用抗生素，不但得不到理想的治疗效果，反应会使得菌株的耐药性进一步加剧，从而给水产养殖业甚至人类生命健康安全带来更为严重的危害。因此，为了有针对性地使用抗生素药物以达到理想的治疗效果，对病原微生物开展抗生素敏感试验，以获知菌株的耐药特性，对于指导临床科学、合理、准确用药，避免疾病的暴发流行及微生物耐药性加剧起着关键性的作用。

目前，在水产细菌病防治领域，药敏检测方法主要采用K-B纸片法与肉汤稀释法，其中K-B纸片法一般须在专业的微生物实验室条件下进行，需要具备专业知识的人员来操作完成，存在操作繁琐、工作量大、周期长等问题，而且无法获得药物的最小抑菌浓度（MIC）值。常规的肉汤稀释法虽然可以测定药物的MIC值，但有时需要专业的仪器设备辅助，实验周期长，且对结果判读不够直观。因此，以上两种方法都不适合在水产养殖生产中推广应用。

发明内容

本发明的目的是提供一种能应用于水产养殖现场的弧菌快速药敏检测试剂盒，从而弥补现有技术的不足。

本发明检测试剂盒，包括有检测板、菌体采集工具、增菌液、药敏检测培养基、比浊管、接种滴管及比色卡；其中检测板包含用于药敏检测的、包被含有不同浓度药物和显色指示剂的检测孔，所述显色指示剂为阿尔玛蓝。

所述的菌体采集工具为无菌接种环或无菌吸管；

所述的增菌液的，其组份及浓度如下：牛肉浸粉6 g/L、可溶性淀粉1.5 g/L、酪蛋白水解物17.5g/L、NaCl 15g/L、CaCl₂ 2.8 mg/L、MgCl₂  4mg/L、鱼肉蛋白胨10g/L。

所述的药敏检测培养基的组成如下：牛肉浸粉6 g、可溶性淀粉1.5 g、酪蛋白水解物17.5 g、NaCl 15g、2.8 mg CaCl₂、4 mg MgCl₂、蒸馏水1 L。

所述的包被了含有药物的显色指示剂的检测孔，是将溶解有药物的海藻糖水溶液与显色指示剂阿尔玛蓝混合，加入到检测孔中进行阴干制成。

检测板还包含有用做质量控制的检测孔和/或用作生长对照的检测孔。 

其中质量控制的检测孔和生长对照的检测孔，是将海藻糖水溶液和显色指示剂阿尔玛蓝混合，加入到检测孔中进行阴干制成。

上述的一种检测板，包含有96个检测孔，呈8行×12列排列。

所述的药物为氨苄青霉素、氟苯尼考、阿米卡星、四环素、土霉素、强力霉素、多粘菌素B、复方新诺明、诺氟沙星、恩诺沙星或利福平。

利用本药敏检测试剂盒进行检测的方法按照以下步骤进行：

1）利用无菌接种环挑取待检弧菌单个菌落，置于增菌液管内搅动均匀，然后将增菌液管置于28 ℃培养箱内震荡培养，直至增菌液浊度与0.5麦度比浊管的浊度相当；

2）将用增菌液扩大培养后的菌液以药敏检测培养基将其稀释1500倍，然后利用接种滴管分别滴加于药敏检测和生长对照的检测孔内，每孔滴加100μl菌液；而质量控制的检测孔内加入100μl无菌的药敏检测培养基；

3）将检测板置于28 ℃培养箱内避光培养6-10h，取出检测板观察微孔内的颜色，对照药敏比色卡进行药敏结果判读，判读标准如下：

A、若质控区颜色呈蓝色，则试验有效，可以继续进行判读；若呈粉红色，则试验无效，需重新进行检测；