[发明专利]一种用于研究醋糟基质中微生物群落结构的总DNA提取方法

权利要求书

1.一种用于研究醋糟基质中微生物群落结构的总DNA提取方法，其特征在于按照下述步骤进行：

（1）先在醋糟基质中加入DNA提取缓冲液，并加入蛋白酶K，振摇，使醋糟基质中的微生物充分悬浮在DNA提取缓冲液中；

（2）将步骤(1)制得的悬浮液用十二烷基磺酸钠裂解醋糟基质中的微生物，离心后取上清；

(3) 加入与步骤(2)取得的上清液等体积的氯仿-异戊醇混合液抽提蛋白，其中氯仿:异戊醇体积比为24: 1，离心后取上清；

(4) 加入与步骤(3)取得的上清液等体积的聚乙烯吡咯烷酮水溶液，去除腐殖酸和酚类物质，离心后取上清；

 (5) 将装有步骤(4)中取得的上清液的离心管上下轻微的摇动，直至离心管中可见絮状物质，将离心管置于-20 ℃沉淀 20 min；

 (6) 用体积分数为75% 的乙醇沉淀DNA后，用去离子无菌水溶解DNA，并用RNA酶去除DNA中的RNA。

2. 根据权利要求1所述的提取方法, 其特征在于所述DNA提取缓冲液的配方为：10 mM Tris-Hcl (pH 8.0)，100 mM Sodium EDTA(pH 8.0)，100 mM Sodium phosphate (pH 8.0)，1.5 M Nacl， 1% CTAB，0.5% β-巯基乙醇和0.5% PVP。

3.根据权利要求1所述的提取方法， 其特征在于所述蛋白酶K的浓度为20 mg/ ml，加入量为12.5 μl。

4.根据权利要求1所述的提取方，其特征在于所述十二烷基磺酸钠的质量分数为20%。

5.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于所述聚乙烯聚吡咯烷酮的质量分数为2%。