[发明专利]一种游离三碘甲状腺原氨酸的纳米磁微粒化学发光测定试剂盒及其制备方法和检测方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种能够准确、灵敏、快速、定量检测人血清样本中游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)的化学发光免疫检测方法，该方法使用的试剂盒以及试剂盒的制备方法。 

背景技术

三碘甲状腺原氨酸(3,5,3’-三碘甲状腺原氨酸，T3)是一种分子量为651的碘化酪氨酸，与甲状腺素(T4)一样是一种重要的甲状腺激素。它用于维持甲状腺功能，参加糖、脂类和蛋白质3大营养物质的代谢生理作用。三碘甲状腺原氨酸是甲状腺功能亢进的首选指标之一，并可作为判断疗效的可靠指标。99.7%三碘甲状腺原氨酸在人体内都以与蛋白结合的形式存在，而真正发挥生理效应的游离三碘甲状腺原氨酸（free triiodothyronine，FT3）含量非常低。 

T3、T4在循环中均有结合态和游离态两种形式，正常情况下两种形式之间保持着动态平衡，其中游离态仅占极少部分但却发挥着真正的生理作用，很多情况下直接测定游离态的甲状腺激素来确定甲状腺功能。总T3、T4的水平会因为TBG的浓度变化而发生改变，但游离T3、游离T4的水平不会受到影响，因而甲状腺激素的生理功能不会受到影响。它是评价甲状腺功能和研究下丘脑—垂体—甲状腺轴的主要指标之一，可用于原发性及继发性甲状腺疾病的辅助诊断及疗效评价。 

FT3是目前医院开展的常规免疫检测项目，对甲状腺疾病的诊断有无可替代的重要参考价值。目前我国已批准上市的FT3免疫检测试剂有进口和国产两大类，其中进口试剂有雅培等跨国定量检测公司的产品，采用的方法学多为化学发光，而国产试剂中采用的方法学多数为放免法，近两年开始出现化学发光类产品。 

放免分析法存在线性范围窄、不易实现全自动化等方法学限制因素。而化学发光免疫分析法具有灵敏度高、检测线性范围宽、操作简便，自动化程度高等优势。目前化学发光免疫分析技术因其有上述诸多优点得到了广泛的应用。 

然而，在实际的免疫检测中，由于待测样品中所含的杂质成分较多，一定程度上影响了检测灵敏度和准确性，所以从复杂的样品基质中快速分离、纯化 出目的待测物，是临床检验工作者面临的难题之一。磁微粒免疫检测技术是利用高分子材料合成一定粒度大小的磁性固相微粒作载体，以物理吸附、化学偶联等方法包被上具有特异性亲和力的抗体或抗原等各种免疫活性物质，具有分离速度快、效率高、可重复性好、操作简单、不影响被分离细胞或其他生物材料的生物学性状和功能等特点，在外加磁场作用下可定向运动，使得某些特殊成分得以分离、浓集或纯化。 

中国发明专利公开CN101949942A公开了一种了游离三碘甲状腺原氨酸检测试剂盒及其制备方法，其中，试剂盒包括包被有二碘甲状腺原氨酸-明胶的磁微粒混悬液、游离三碘甲状腺原氨酸系列校准品、辣根过氧化物酶标记的游离三碘甲状腺原氨酸抗体、发光底物A液、发光底物B液及磷酸盐缓冲液。使用该专利公开的试剂盒成功利用了磁微粒免疫检测技术实现了对进行游离三碘甲状腺原氨酸的准确检测。然而，该试剂盒的制备成本和使用成本高，原因是，一方面，在进行包被有二碘甲状腺原氨酸-明胶的磁微粒混悬液的制备时，不仅过程复杂，而且直接将二碘甲状腺原氨酸-明胶包被于磁微粒上的包被率较低，导致较高的成本；另一方面，其采取辣根过氧化物酶标记的游离三碘甲状腺原氨酸抗体，该抗体的制备也是非常繁琐，且标记率低，限制其检测效果和导致成本增加。此外，试剂盒在制备工艺上所存在的不易控和稳定性较差的因素，除了导致如前所述的成本增加的问题外，还使得检测的批间差大，限制了检测方法的精密度。 

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种改进的游离三碘甲状腺原氨酸的纳米磁微粒化学发光测定方法，该方法不仅准确性好、灵敏度高，且精密度特别是分析间精密度高，此外该方法成本低。 

本发明同时还要提供一种游离三碘甲状腺原氨酸的纳米磁微粒化学发光测定所用的试剂盒，其能够以较低的成本制备得到，且能够实现游离三碘甲状腺原氨酸准确和高精确地定量测定。 

此外，本发明还提供一种游离三碘甲状腺原氨酸的纳米磁微粒化学发光测定所用的试剂盒的简便和低成本的制备方法。 

为解决以上技术问题，本发明采取的一种技术方案是： 

一种用于游离三碘甲状腺原氨酸（FT3）的纳米磁微粒化学发光测定的试 剂盒，该试剂盒包括用于化学发光免疫检测的免疫反应步骤的免疫反应试剂，特别是，所述的免疫反应试剂包括第一试剂、第二试剂和磁分离试剂，其中：