[发明专利]大肠杆菌-梭菌穿梭表达载体及其构建和表达在审
| 申请号： | 201210571635.8 | 申请日： | 2012-12-25 |
| 公开（公告）号： | CN103898098A | 公开（公告）日： | 2014-07-02 |
| 发明（设计）人： | 姚泉洪;田永生;彭日荷;许晶;王波;王丽娟;韩静 | 申请（专利权）人： | 上海市农业科学院 |
| 主分类号： | C12N15/11 | 分类号： | C12N15/11;C12N15/113;C12N15/74;C12Q1/34 |
| 代理公司： | 上海开祺知识产权代理有限公司 31114 | 代理人： | 费开逵 |
| 地址： | 201106 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 大肠杆菌 穿梭 表达 载体 及其 构建 | ||
【权利要求书】：
1.大肠杆菌lacZ基因，其核苷酸序列如SEQ IDNo.1所示。
2.梭菌OABC基因的启动子，其核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。
3.包含权利要求2所述的梭菌OABC基因的启动子的pYN7443质粒。
4.大肠杆菌-梭菌穿梭表达载体，其特征在于，是在权利要求3所述的pYN7443质粒的BamHI和SacI酶切位点之间插入权利要求1所述的大肠杆菌lacZ基因编码的序列构建而成的。
5.权利要求4所述的大肠杆菌-梭菌穿梭表达载体的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
1）根据梭菌偏爱密码子合成生物法合成大肠杆菌lacZ基因；
2）构建包含梭菌OABC基因的启动子的pYN7443质粒；
3）将所述大肠杆菌lacZ基因与pYN7443质粒连接构建大肠杆菌-梭菌穿梭表达载体。
6.权利要求4所述的梭菌穿梭表达载体转化到梭菌中并测定大肠杆菌lacZ基因活性的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1）电击法转化梭菌；
2）大肠杆菌lacZ基因的活性测定。
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