[发明专利]化学修饰的胸腺五肽及其合成方法

说明书

技术领域

本发明属于生物化学药物合成领域，更具体地，本发明涉及一种化学修饰的胸腺五肽及其合成方法。

背景技术

胸腺五肽是我国第一个自主研发的化学合成多肽药物，也是医院销售额最高的化学合成类多肽药物之一，并且在我国医药市场中的用药规模逐年快速增长。胸腺五肽在临床上可用于多种恶性肿瘤的免疫治疗，以及手术、放疗和化疗的辅助治疗，并有效防治继发感染等并发症。此外，胸腺五肽也临床用于慢性病毒性肝炎、重大外科手术及严重感染、自身免疫性疾病(如类风湿性关节炎和红斑狼疮等)、严重烧伤、II型糖尿病以及年老体弱免疫功能低下等疾病的治疗或辅助治疗，临床应用领域十分广阔。

药代动力学研究表明：胸腺五肽在人血浆中很快由蛋白酶和氨肽酶降解，半衰期约为30秒。目前在临床使用的制剂是注射用胸腺五肽冻干粉针，因而半衰期很短，极易在血浆中被酶降解而失去生物活性，生物利用度很低，临床使用时需要多次反复和长期注射等缺陷是目前胸腺五肽产品的主要问题。

目前主要采用微球制剂或聚乙二醇(PEG)化学修饰两大技术方案延长多肽药物的半衰期：微球注射剂目前是多肽缓释最成功的制剂技术之一，本技术以生物可降解聚合物如PLGA为骨架材料包裹多肽药物，使其在体内达到缓释效果，近10年来取得了许多成功的先例，如法国IPSEN公司研发的曲普瑞林PLGA微球、日本武田制药开发的亮丙瑞林微球等。但是，微球制剂技术目前存在包封率低，突释效应明显以及制剂工艺技术要求高，因此目前在国内多肽药物行业还难以推广。

PEG修饰在化学修饰法延长蛋白类药物取得了成功：如先灵葆雅公司的PEG化IFNα-2b、罗氏公司的PEG化IFNα-2a等。PEG修饰在化学修饰法的缺点是：由于PEG本身是聚合物，难以得到修饰位点精确、产物化学结构唯一的产物。此外，PEG分子量大，修饰后药物的生物活性大大下降。

近年来，以白蛋白的亲和性小分子配体如肉豆蔻酸修饰蛋白和多肽药物取得了极大的成功。诺和诺德(Novo Nordisk)公司的胰岛素产品诺和平(Levemir)就是以白蛋白的亲和性小分子配体肉豆蔻酸修饰的多肽药物，其半衰期从原来的4-6分钟延长至5-7小时。此后，诺和诺德公司利用类似的技术推出了肉豆蔻酸修饰的胰高血糖素(GLP-1)(商品名：Victoza)，将其半衰期从1.5-2分钟延长至11-15小时。然而，诺和诺德公司这两种产品的工艺都是先用基因工程表达胰岛素或胰高血糖素，而后通过肉豆蔻酸修饰得到最终产物。由于胰岛素或胰高血糖素中存在多个氨基修饰位点，因此应用本工艺难以得到修饰位点精确、产物化学结构唯一的产物。

发明内容

基于此，本发明提供了一种新的化学修饰的胸腺五肽及其合成方法，化学修饰的胸腺五肽修饰位点精确，化学结构明确，在保持胸腺五肽疗效的基础上，延长了胸腺五肽的半衰期，提高了胸腺五肽的生物利用度。

一种化学修饰的胸腺五肽，具有以下结构：

A-Arg-Lys-Asp-Val-Try-OH或H-Arg-Lys(A)-Asp-Val-Try-OH，所述A为小分子配体，所述小分子配体为与人血清白蛋白亲和性结合的脂肪酸，或与人血清白游离巯基偶联的马来酰亚胺衍生物。

在其中三个实施例中，所述脂肪酸为肉豆蔻酸，白蛋白上有多个结合位点能够高亲和性、高选择性地与肉豆蔻酸相结合。所述化学修饰的胸腺五肽的结构为：Myr-Arg-Lys-Asp-Val-Try-OH或H-Arg-Lys(Myr)-Asp-Val-Try-OH。

在其中一个实施例中，所述马来酰亚胺衍生物为马来酰亚胺的羧酸衍生物如丁酸、己酸或辛酸等。马来酰亚胺能够选择性地与白蛋白游离巯基发生亲核加成反应。

本发明还提供了上述化学修饰的胸腺五肽的合成方法，包括以下步骤：

(1)以Fmoc保护的酪氨酸王树脂为起始原料，按照标准Fmoc策略合成Fmoc保护的载有胸腺五肽的王树脂；

(2)以20％哌啶的DMF溶液(v/v)脱去末端氨基Fmoc保护基团后，将小分子配体溶于二甲基甲酰胺，以HBTU和DIEA活化后与载有胸腺五肽的王树脂混合，缩合1小时后抽干，DMF洗涤，得到载有小分子配体修饰的胸腺五肽的王树脂；所述小分子配体与Fmoc保护的酪氨酸王树脂的摩尔比为2～6∶1；

(3)用三氟乙酸切割王树脂，得到小分子配体修饰的胸腺五肽粗产物，纯化、冻干得到纯产物。

在其中一个实施例中，所述小分子配体与Fmoc保护的酪氨酸王树脂的摩尔比为4∶1。