[发明专利]光声-荧光流式细胞仪

权利要求书

1.一种光声-荧光流式细胞仪，其特征在于包括光学激发系统、荧光信号接收系统、光声信号接收系统、样品台和计算机显示控制系统；光学激发系统分别与荧光信号接收系统、样品台、计算机显示控制系统连接，光声信号接收系统分别与样品台、计算机显示控制系统连接，荧光信号接收系统与计算机显示控制系统连接；计算机显示控制系统分别与光学激发系统、荧光信号接收系统、光声信号接收系统电气连接；

所述的光学激发系统包括激发光源、光阑、柱面透镜、狭缝A、消色差透镜A、反射镜、二色分光镜A和显微物镜；激发光源与计算机显示控制系统电气连接；光阑、柱面透镜、狭缝A、消色差透镜A、反射镜、二色分光镜A与显微物镜依次机械连接；显微物镜与所述的样品台机械连接；

所述的荧光信号接收系统包括依次机械连接的二色分光镜B、滤光片、消色差透镜B、狭缝B和光电倍增管；二色分光镜B设置于反射镜和二色分光镜A之间，光电倍增管与计算机显示控制系统电气连接；

所述的光声信号接收系统包括依次连接的聚焦超声探测器和放大器；聚焦超声探测器和样品台连接，放大器和计算机显示控制系统电气连接。

2.根据权利要求1所述的光声-荧光流式细胞仪，其特征在于：所述的光学激发系统器件全部固定在暗箱中，光阑、柱面透镜、狭缝A、消色差透镜A可在暗箱轨道中移动；所述的暗箱为覆盖整个光路的暗箱。

3.根据权利要求1所述的光声-荧光流式细胞仪，其特征在于：所述的荧光信号接收系统与光学激发系统成共焦结构。

4.根据权利要求3所述的光声-荧光流式细胞仪，其特征在于：所述的荧光信号接收系统中的狭缝B与样品台分别位于消色差透镜B和显微物镜的焦点上。

5.根据权利要求1所述的光声-荧光流式细胞仪，其特征在于：所述的聚焦超声探测器的声学焦点与光学激发系统中的显微物镜的光学焦点共焦。

6.根据权利要求1所述的光声-荧光流式细胞仪，其特征在于：所述的激发光源为短脉冲激发光源，所述的短脉冲激发光源的激发波长为400～2500nm，脉宽范围为1～50ns，重复频率为1Hz～15KHz。

7.根据权利要求6所述的光声-荧光流式细胞仪，其特征在于：所述的激发光源的激发波长为532nm，脉宽范围为10ns，重复频率为15Hz。

8.根据权利要求1所述的光声-荧光流式细胞仪，其特征在于：所述的计算机显示控制系统配置有双通道并行采集卡和采集控制软件。

9.运用权利要求1～8任一项所述的光声-荧光流式细胞仪的检测方法，包括以下步骤：

（1）将样品固定放置在样品台中央，将显微物镜放在样品的正上方、聚焦超声探测器置于样品的正下方、光电倍增管置于显微物镜斜上方的荧光出光口处，光电倍增管外面用暗箱封闭；

（2）激发光源发出脉冲激光，依次经过光阑、柱面透镜、狭缝A、消色差透镜A、反射镜及显微物镜后，形成一聚焦线光斑横跨于被检测的样品上，并与样品的流动方向垂直；聚焦线光斑的大小为5μm×60μm；

（3）当样品流经线光斑区域时，由于激光的激发而同时产生光声和荧光信号；

（4）产生的荧光信号经过显微物镜、二色分光镜B、滤光片、消色差透镜B、及狭缝B后被光电倍增管接收；

（5）产生的光声信号同时被样品台下方的聚焦超声探测器接收；

（6）光声信号和荧光信号分别同时被双通道并行采集卡采集信号强度和时间波形，后储存到计算机中；

（7）待采集完成后，通过计算机的信号分析处理，分别得到样品中光声流式检测和荧光流式检测的通过线光斑的细胞或颗粒的计数；

步骤（4）中所述的荧光信号的接收方式采用反向共焦接收模式；步骤（5）中所述的光声信号的接收方式采用对向共焦接收模式。

10.权利要求1～8任一项所述的光声-荧光流式细胞仪的应用，其特征在于：所述的光声-荧光流式细胞仪应用于细胞或颗粒的定量分析和监测。