[发明专利]引物及该引物检测BCR/ABL融合基因ABL激酶区耐药突变位点的方法无效
申请号: | 201210575817.2 | 申请日: | 2012-12-26 |
公开(公告)号: | CN103045590A | 公开(公告)日: | 2013-04-17 |
发明(设计)人: | 李小青;孙黎;陈然;叶贵;李金欢;郝玮;梁超;韩韬;涂赞兵;方国伟;陈贵;黄士昂 | 申请(专利权)人: | 武汉康圣达医学检验所有限公司 |
主分类号: | C12N15/11 | 分类号: | C12N15/11;C12Q1/68 |
代理公司: | 北京联瑞联丰知识产权代理事务所(普通合伙) 11411 | 代理人: | 郑自群 |
地址: | 430000 湖北省武汉市东湖开发区高新大道6*** | 国省代码: | 湖北;42 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 引物 检测 bcr abl 融合 基因 激酶 耐药 突变 方法 | ||
1.引物,包括扩增引物和测序引物,其特征在于:
所述扩增引物序列如下:
BCR_p210-F:5’-TGACCAACTCGTGTGTGAAACTC-3’、
ABL_p210-R:5’-TCCACTTCGTCTGAGATACTGGATT-3’、
BCR_p190-F:5’-ACCGCATGTTCCGGGACAAAAG-3’、
ABL_p190-R:5’-ACAGCATTCCGCTGACCATCAATAAG-3’、
所述测序引物序列如下:
ABL Kinase-F:5’-TGGTTCATCATCATTCAACGGTGG-3’、
ABL Kinase-R:5’-AGACGTCGGACTTGATGGAGAACT-3’。
2.根据权利要求1所述引物,其特征在于:所述的引物序列是向扩增引物或测序引物的5’端或/和3’端延长的序列。
3.根据权利要求1所述引物,其特征在于:所述的引物序列是和扩增引物或测序引物同源性大于85%的序列。
4.根据权利要求1所述引物,其特征在于:所述的引物序列是与扩增引物或测序引物碱基序列互补的序列。
5.根据权利要求1所述引物,其特征在于:所述的引物序列是由扩增引物或测序引物序列中的任意一种或一种以上的组合序列。
6.根据权利要求1-5任意一项所述该引物检测BCR/ABL融合基因ABL激酶区耐药突变位点的方法,其特征在于包括以下步骤:
(1)、提取RNA;
(2)、进行逆转录反应,获得逆转录产物cDNA;
(3)、以步骤(2)的逆转录产物为PCR反应模板,分别以BCR_p210-F和ABL_p210-R为上下游引物,BCR_p190-F和ABL_p190-R为上下游引物进行第一轮PCR扩增,获得扩增产物;
(4)、取步骤(3)的扩增产物,以ABL Kinase-F和ABL Kinase-R为上下游引物进行第二轮PCR扩增,获得扩增产物;
(5)、取步骤(4)的扩增产物,以ABL Kinase-F和ABL Kinase-R为测序引物,进行测序检测。
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