[发明专利]一种基于单链DNA核酸适配体修饰氧化石墨烯涂层的固相微萃取头制备方法

权利要求书

1.一种基于单链DNA修饰氧化石墨烯涂层的新型固相微萃取头的制备方法，按以下步骤进行：

（1）对石英纤维进行丙酮洗、苯洗、碱洗、酸洗、高温活化，然后用具有不饱和双键的硅烷化试剂在纤维表面进行硅烷化处理；

（2）在聚合溶剂中加入功能单体、交联剂及引发剂，充分混合制得多孔聚合物溶液，取一定量所述多孔聚合物溶液于试管中，插入硅烷化石英纤维，通氮气除氧后，密封试管口，水浴中热引发共聚反应；聚合一定时间，取出石英纤维，置于干燥箱中于一定温度下老化一定时间；

（3）在同一根石英纤维上重复步骤（2）若干次，即在石英纤维表面重复涂渍多孔聚合物涂层；

（4）用具有氨基的硅烷化试剂对得到的多孔聚合物涂层石英纤维进行硅烷化处理；

（5）在PBS缓冲液、催化剂EDC溶液、NHS溶液及氧化石墨烯水溶液的混合液中，插入硅烷化多孔聚合物涂层石英纤维，室温反应一定时间，取出纤维，置于干燥箱中于一定温度下老化；

（6）在同一根石英纤维上依次重复步骤（4）及（5）若干次；

（7）将第（6）步中最后得到的氧化石墨烯/多孔聚合物涂层石英纤维取出，插入到PBS缓冲液、EDC溶液、NHS溶液及核酸适配体溶液的混合液中，室温反应一定时间，取出后用PBS缓冲液清洗，氮气吹干，保存。

2.如权利要求1所述的基于核酸适配体/氧化石墨烯/多孔聚合物固相微萃取涂层的萃取头的制备方法，其特征在于：所述步骤（2）中多孔聚合物溶液的制备所采用的聚合溶剂为丙酮溶液，加入的功能单体为甲基丙烯酸，加入的交联剂为三羟甲基丙烷三甲基丙烯酸酯，加入的引发剂为偶氮二异丁腈。

3.如权利要求2所述的基于核酸适配体/氧化石墨烯/多孔聚合物固相微萃取涂层的萃取头的制备方法，其特征在于：所述步骤（2）中多孔聚合物溶液的制备是在锥形瓶中加入335μL甲基丙烯酸功能单体、5mL三羟甲基丙烷三甲基丙烯酸酯交联剂、50mg偶氮二异丁腈引发剂及45mL丙酮溶液，充分摇匀。

4.如权利要求1所述的基于核酸适配体/氧化石墨烯/多孔聚合物固相微萃取涂层的萃取头的制备方法，其特征在于步骤5中所采用的氧化石墨烯化学键合条件为：所述EDC溶液浓度为4.5~6mM，NHS溶液浓度为8~12mM，氧化石墨烯水溶液的浓度为0.35~0.6mg/mL的混合液中，PBS缓冲液:EDC溶液:NHS溶液:氧化石墨烯水溶液体积比为2:2:1:2；室温下键合，键合时间为24h。

5.如权利要求4所述的基于核酸适配体/氧化石墨烯/多孔聚合物固相微萃取涂层的萃取头的制备方法，其特征在于步骤5中所采用的氧化石墨烯化学键合条件为：所述EDC溶液浓度为5mM，NHS溶液浓度为10mM，氧化石墨烯水溶液的浓度为0.5mg/mL的混合液中，PBS缓冲液:EDC溶液:NHS溶液:氧化石墨烯水溶液体积比为2:2:1:2。

6.如权利要求1所述的基于核酸适配体/氧化石墨烯/多孔聚合物固相微萃取涂层的萃取头的制备方法，其特征在于步骤7所采用的核酸适配体化学键合条件为：所述EDC溶液浓度为4.5~6mM，NHS溶液浓度为8~12mM，核酸适配体溶液浓度为5.5~6.5μgmL，PBS缓冲液:EDC溶液:NHS溶液:核酸适配体溶液体积比为1:6:4:5,室温下键合，键合时间为24h。

7.如权利要求6所述的基于核酸适配体/氧化石墨烯/多孔聚合物固相微萃取涂层的萃取头的制备方法，其特征在于步骤7所采用的核酸适配体化学键合条件为：所述EDC溶液浓度为5mM，NHS溶液浓度为10mM，核酸适配体溶液浓度为6.25μgmL，PBS缓冲液:EDC溶液:NHS溶液:核酸适配体溶液体积比为1:6:4:5。

8.如权利要求1所述的基于核酸适配体/氧化石墨烯/多孔聚合物固相微萃取涂层的萃取头的制备方法，其特征在于：石英纤维表面重复涂渍多孔聚合物涂层2~4层。

9.如权利要求1所述的基于核酸适配体/氧化石墨烯/多孔聚合物固相微萃取涂层的萃取头的制备方法，其特征在于：步骤6是指对同一根石英纤维上依次对步骤4及5重复4~6次。

10.采用权利要求1~9任一方法所制备的基于核酸适配体/氧化石墨烯/多孔聚合物固相微萃取涂层的萃取头。