[发明专利]一种制备脑钠肽的方法及应用

说明书

技术领域

本发明属于基因工程和蛋白表达领域，涉及一种用生物工程技术高效制备脑钠肽的方法，产物可作为抗原物质进行动物免疫，筛选相关抗体，同时为临床化学诊断所需校准品、标准物质和参考品的制备开发奠定基础。

背景技术

脑钠肽(Brain Natriuretic Peptide，BNP)又称B型利钠肽(B-type NatriureticPeptide)、脑利钠肽，是继心钠肽(ANP)后利钠肽系统的又一成员，它主要来源于心室，心室负荷和室壁张力的改变是刺激BNP分泌的主要条件。BNP的清除有两条途径：一是由利尿钠肽家族的C型受体介导，内吞入胞内后由溶酶体降解；二是经中性内肽酶(NEP)降解。

BNP的心血管作用

BNP同ANP均是肾素血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)的天然拮抗剂，亦抵制后叶加压素及交感神经的保钠保水、升高血压作用。BNP同ANP一起参与了血压、血容量以及水盐平衡的调节，提高肾小球滤过率，利钠利尿，扩张血管，降低体循环血管阻力及血浆容量，这些均起到维护心功能作用。BNP又不同于ANP，ANP主要在心房合成，在心房负荷过重或扩张时分泌增加，血浆浓度升高，主要反映肺血管压力的变化，而BNP主要在心室合成，在心室负荷过重或扩张时增加，因此反映心室功能改变更敏感、更具特异性。

BNP对心功能的诊断价值

心衰是多种疾病的终末阶段，心衰可分急性心衰(AHF)和慢性心衰(CHF)，CHF根据纽约心脏病协会(NYHA)心功能分级分成I、II、III、IV级。I级心功能实际上无临床心衰症状，可称为左室功能不良(LVD)。基于BNP与心功能的密切关系，许多研究人员做了大量的工作以探讨它的临床应用。在CHF的病理生理改变及诊断中，BNP的重要性得到肯定。Mukoyama等报道CHF患者血浆BNP浓度较正常升高，且与心衰严重程度呈正比，目前关于BNP的临床研究主要集中在左室功能障碍(LVD)方面，这里的左室功能指收缩功能。无论正常人还是LVD患者，BNP均主要由左室心肌细胞合成分泌，进入小静脉回流至室间隔静脉通过冠状窦进入循环，其分泌主要由左室壁张力进行调节，LVD的严重程度与其分泌正相关，外周血BNP水平可反映心室分泌率及LVD程度。目前中、重度LVD依据临床检查较容易诊断，而轻度LVD(NYHA分级I级)却很难做到，但对LVD的确诊很重要，尤其对哪些心肌梗死后恢复正常的患者，静息状态下或运动后3分钟测量血浆BNP、ANP等肽类激素及cGMP浓度均高于正常对照组，但只有BNP具有显著统计学意义，且通过ROC曲线分析，发现BNP对正常与LVD的鉴别能力明显优于ANP及cGMP等，是利钠肽系统对LVD的最佳标记物。越来越多的文献支持在心肌梗死(MI)后测定BNP。这不仅可识别有无左心收缩功能不全，而且在判断左室重构和死亡危险方面可能优于心超声诊断。在临床实际工作中，BNP还有助于将心衰引起的气喘和其它原因引起的气喘区分开。正常BNP几乎可以排除左心功能不全引起的气喘。

BNP对心脏病预后的评估作用

传统上对心衰患者的长期监控是非常不完善的。如果有一个价廉的生化标志物来监控心衰，那将是非常有利的。BNP是否是这样的一个标志物？如果有床边的BNP试验，则有可能像糖尿病患者一样监控心衰患者。这方面BNP有很大潜力。Tsutamoto等对85名患有CHF的患者(EF＜45％)随访两年，比较BNP与ANP、cGMP等在CHF的预后评估方面的作用，发现血浆BNP在估计慢性CHF患者的病死率上优于ANP及cGMP，而且所提供的预后信息不依赖于其他如PCWP和LVEF等血流动力学指标。在老年人群中，升高的血浆BNP浓度与整个人群的病死率明显相关，无论是否患有明确的心血管疾病，均可通过测量血浆BNP对死亡率进行预测。血浆BNP水平与AMI后LVD程度呈正相关，且研究证明，BNP的分泌增加主要集中在梗死与非梗死区域交界的边缘地带，此处室壁机械张力最大，因此BNP可准确反映梗死局部室壁张力的变化，而张力又受到梗死面积、左室形态改变、心肌机械应力等因素影响，因此对心肌梗死后病人测量血浆BNP可以同时预测梗死区大小、左室功能。几篇报告都提出对于预测心肌梗死后左室重构的进程来说，血浆BNP测定是一种简便、准确、有用的生化指标，由于左室重构在临床表现及超声心动图不易发现，BNP的测定对于心肌梗死后危险度分级该是价优质好的筛选方法。