[发明专利]雷莫拉宁衍生物及其制备方法和用途

说明书

技术领域

本发明属于基因工程和医药技术领域，具体涉及式(I)所示的雷莫拉宁衍生物及其制备方法和其在制备抗感染，尤其严重感染的药物中的用途。 

背景技术

雷莫拉宁(ramoplanin)是从游动放线菌Actinoplanes sp.ATCC 33076的发酵液中分离得到的一种脂肽类抗生素，对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Stap hylococcus aureus，MRSA)、万古霉素耐药肠球菌(vancomycin-resistant Enterococcus faecium，VRE)以及一些抗红霉素或氨苄西林的革兰氏阳性菌都有显著抑菌活性。与其他糖肽类抗生素万古霉素和替考拉宁比较，雷莫拉宁对大部分革兰氏阳性病原菌具有更高的抑制活性[Cavalleri等，1984；Pallanza等，1984；Kettenring等，1989]。2000年6月，雷莫拉宁的口服和局部给药制剂在美国和欧洲开始了III期临床研究，用于治疗由于VRE引起的血液感染。 

雷莫拉宁的分子结构核心是由17个氨基酸残基组成的一个环肽骨架，其中共有9个L型氨基酸和7个D型氨基酸。在此骨架上，连接有两个D-甘露糖分子以及不同的双不饱和脂肪酸侧链分子。根据脂肪酸侧链的不同，分为A1、A2、A3三个组分，其天然产物中A2组分占约80％。在雷莫拉宁的结构改造以及构效关系研究方面，已有的文献主要是基于合成和半合成的方法得到其类似物，并在此基础上研究其抗菌活性和功能基团等[McCafferty等，2002]。 

雷莫拉宁A2组分结构 

根据雷莫拉宁的分子结构特点，对其结构改造主要可以归类于3种：第一种是对核心环肽骨架的改造，包括线性化、内酯键替换为酰胺键、氨基酸的替换等，如将其4位或10位的Orn替换为Ala，得到的类似物的抑菌活性或保留(4位替换)或降低(10位替换)[Cudic等，2002]；第二种是水解得到脱糖的雷莫拉宁糖苷配基，其活性与水解前相当，因此双甘露糖基在雷莫拉宁分子中的作用尚待研究[Ciabatti等，1996；Cudic等，2002]；第三种是对脂肪酸侧链的改造，包括侧链上双键的化学还原、侧链的替换等，如Ciabatti等通过Edman降解和酰化的方法得到了超过130种侧链替换的类似物，并对部分化合物的活性进行了测试[Ciabatti等，2007]。 

据文献调研，尚未有保留2Z，4E-二烯结构的侧链延长的雷莫拉宁类似物的半合成报道。因此，发明人通过基因工程的方法改造雷莫拉宁产生菌，获得具有更长脂肪酸侧链而保留其2Z，4E-二烯结构的雷莫拉宁类 似物。 

发明内容

本发明的一个目的是提供新型脂肽类衍生物，尤其涉及雷莫拉宁衍生物，经过初步MIC试验，证实对耐药葡萄球菌和万古霉素耐药肠球菌(VRE)有较强的杀菌活性。 

本发明提供的是如下式(I)所示的雷莫拉宁衍生物：其分子式为C₁₂₁H₁₅₈ClN₂₁O₄₀，绝对分子量为2580.07，相对分子量为2582.12。其特征为17个天然氨基酸构成的环肽，L-Hpg氨基酸苯环羟基上连接两个甘露糖和L-Asn氨基酸上连接的11碳长链脂肪酸；比雷莫拉宁A2组分的区别为侧链脂肪酸多了两个碳。此结构为本发明首次报道分离并获得，初步的杀耐药性肠球菌活性强于雷莫拉宁A2组分，并且与已知的万古霉素类化合物有明显区别，可以杀死对万古霉素耐药性的菌株，未来有希望成为万古霉素耐药性增强后此类耐药菌的最佳替代抗生素。 

式(I) 

本发明的另一个目的是提供上述式(I)所示的雷莫拉宁衍生物的制备方法，包括以下步骤： 

(1)分别将雷莫拉宁产生菌游动放线菌Actinoplanes sp.ATCC 33076的ramo orf24-orf25-orf26和orf26基因敲除，获得游动放线菌突变株mPHX9-96-6和mPHX10-12-6。 

(2)并分别构建含恩拉菌素产生菌杀真菌链霉菌Streptomycesfungicidicus ATCC 21013的end orf45-orf46基因和end orf45的重组质粒pPHX9-88-6和pPHX10-23-1，并将其转入到大肠杆菌ET12567中。