[发明专利]防治重楼根腐病的生防菌株KMXU28及其生防菌剂

权利要求书

1.一种防治重楼根腐病的生防菌株KMXU28，为枯草芽孢杆菌 (Bacillus subtilis)，2012年9月21日保藏于中国微生物菌种保藏委员会普通微生物中心，保藏号：CGMCC NO. 6594。

2.用权利要求1所述的生防菌株KMXU28制备的防治重楼根腐病生防菌剂，其特征在于该生防菌剂经如下步骤得到：

a. 将菌株KMXU28移植到试管中进行一环活化，28℃ 培养48小时；试管中的PSA培养基为：称取200g马铃薯，洗净去皮切碎，加水1000ml煮沸半个小时，纱布过滤，再加20g蔗糖和17g琼脂，溶解后趁热纱布过滤，15磅温度为121℃的蒸气灭菌20分钟；

b. 取一环活化后的菌苔移入用1000ml锥形瓶装的600ml配方为：胰蛋白胨  10g/L，酵母提取物  5g/L，氯化钠  5g/L，pH7.0的LB培养液中，在120转/min、28 ℃下培养72小时，获得发酵菌液；

c. 将发酵菌液按接种量1：200培的比例接种于种子罐中、在与b步骤相同的LB培养液中发酵培养，种子罐的温度为30-32℃，发酵16-18小时后，获得发酵用菌种；

d. 将发酵用菌种按接种量1：20倍的比例接种于发酵罐中、在与b步骤相同的LB培养液中发酵培养，发酵罐的温度为30-32℃，发酵72-96小时，当发酵罐中的发酵液中芽孢含量大于或等于85-90%，酸碱度为6.5～7.5时，储存作为生防菌液；

e. 将生防菌液5000rpm离心6 min，取离心后的菌体与保藏液按1：50 g/ml 配成活性菌剂，成品中活菌总浓度为1×10¹⁰～1×10¹¹ CFU/ml；菌体保藏液为：0.015mol/L磷酸盐缓冲液。