[发明专利]防治重楼根腐病的生防菌株KMXU28及其生防菌剂

说明书

技术领域：

本发明涉及防治重楼根腐病的生防菌株KMXU28及其生防菌剂，属生物农药技术领域。 

背景技术：

滇重楼为百合科植物云南重楼Paris polyphylla Smith var. yunnanensis (Franch.) Hara的干燥根茎，为《中国药典》2010 年版一部所收载的品种之一[1]，具有较强的抗肿瘤、止血、镇痛、镇静、免疫调节等生物活性，又是传统医学中一味功效显著的中药材，应用广泛[2]。近年来，随着重楼药用功效的不断开发，民间及企业用药需求量的大幅攀升，重楼价格持续高涨，每年的消耗远远超出了重楼的年生长量，现有药源远不能保障市场需要，供需矛盾亦日益突出，长期以来全部利用野生资源，野生资源急剧减少、破坏严重，加之资源再生周期长（平均需要10～12 年），目前已出现了较严重的资源危机，导致重楼资源面临枯竭的威胁，严重影响到以其为原料的医药工业的生存与发展[3]。因此，为了实现资源的可持续利用，近10年来云南省重楼人工栽培面积不断扩大。因滇重楼生长周期较长，在人工栽培中滇重楼病害也日趋严重，特别是具有毁灭性的重楼根腐病等土传病害，主要通过根部切块或其它原因造成的伤口侵入导致整个滇重楼植株根部腐烂死亡，已经成为栽培的关键问题。引起滇重楼根腐病的病原菌为多种病原菌协同侵染引起的土传复合病害，其病原主要包括真菌(Fusarium solani, F. oxysporum,Phytophthora cactorum，Rhizoctonia solani)等。调查发现，该病发病率通常在 20％～25％，重者可达 30％ 以上，引起滇重楼根腐死亡，造成严重损失，严重影响和制约滇重楼产业的发展[4-5]。但是近年来, 随着滇重楼规模化种植面积的不断扩大, 采集野生资源已不能满足市场需要，而人工栽培种施用化学农药又直接影响滇重楼质量和污染环境。因此，一种安全、有效的生物防治措施被赋予极大的期望。 

经文献检索，未见与本发明相同的公开报道。 

参考文献： 

[1] 李恒，1998．重楼属植物[M]．北京：科学出版社. 

[2] 武珊珊，高文远，段宏泉，等，2004. 重楼化学成分和药理作用研究进展[J]. 中草药，35（3）：344-346. 

[3] 孟繁蕴，汪丽娅，冯成强，等，2005. 滇重楼引种驯化研究进展[J]. 中草药，36（7）：102-104.  

[4] 马青. 2009. 滇重楼的病害及其防治[J].湖北林业科技,01: 234-236. 

[5] 张金渝,虞泓,张时刚,邓成西. 2004. 滇重楼与华重楼的野生驯化和繁殖技术研究[J]. 西南农业学报;03:123-125 

发明内容：

本发明的目的在于针对目前农业生产中滇重楼根腐病防治在栽培中难度大、成本高，不宜使用化学农药和农药残留高的问题，提供一种防治滇重楼根腐病的生防菌株KMXU28及其生防菌剂。 

本发明从分离自云南省丽江市滇重楼种植基地健康滇重楼植株中，对其鉴定结果表明该细菌属于枯草芽孢杆菌，该菌株命名为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis) KMXU28，具有显著的拮抗植物病原真菌和细菌作用，该菌株已经保存在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；地址：中国. 北京市朝阳区北辰西路1号院3号；保藏日期：2012年9月21；保藏号：CGMCC NO.6594。 

本发明的菌体特征及菌落特征：单个细胞 0.7～0.8×2～3微米，着色均匀。无荚膜，周生鞭毛，能运动。革兰氏阳性菌，芽孢0.6～0.9×1.0～1.5微米，椭圆到柱状，位于菌体中央或稍偏，芽孢形成后菌体不膨大。菌落表面粗糙不透明，污白色或微黄色，在液体培养基中生长时，常形成皱醭。需氧菌。可利用蛋白质、多种糖及淀粉，分解色氨酸形成吲哚。 

本发明的生防菌剂经如下步骤得到： 

a. 将菌株KMXU28移植到试管中进行一环活化，28℃ 培养48小时；试管中的PSA培养基为：称取200g马铃薯，洗净去皮切碎，加水1000ml煮沸半个小时，纱布过滤，再加20g蔗糖和17g琼脂，溶解后趁热纱布过滤，15磅温度为121℃的蒸气灭菌20分钟； 

b. 取一环活化后的菌苔移入用1000ml锥形瓶装的600ml配方为：胰蛋白胨   10g/L，酵母提取物  5g/L，氯化钠  5g/L，pH7.0的LB培养液中，在120转/min、28 ℃下培养72小时，获得发酵菌液；