[发明专利]与转基因植物外源Bt蛋白相互作用的人类蛋白NDUFA10

权利要求书

1.与转基因植物外源Bt蛋白相互作用的人类蛋白NDUFA10，所述人类蛋白NDUFA10的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，或该序列经替换、缺失或添加一个或几个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。

2.编码权利要求1所述蛋白NDUFA10的基因。

3.如权利要求2所述的基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQID No.2所示。

4.含有权利要求2或3所述基因的载体。

5.含有权利要求2或3所述基因的转基因细胞系。

6.含有权利要求2或3所述基因的工程菌。

7.权利要求1所述蛋白NDUFA10在转基因生物安全评价领域中Bt蛋白对人体潜在风险的预测中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，当外源Bt蛋白进入人体内时，通过监测蛋白NDUFA10及其信号通路的下游蛋白，从而评价转基因植物安全性。

9.一种筛选与转基因植物外源Bt蛋白相互作用的人类蛋白NDUFA10的方法，利用酵母双杂交的方法通过转基因植物中外源Bt蛋白对人的cDNA文库进行筛选，获得与外源蛋白相互作用的人类蛋白，并通过免疫共沉淀的方法对互作进行阳性验证，从而筛选得到与转基因植物外源Bt蛋白相互作用的人类蛋白NDUFA10，所述人类蛋白NDUFA10的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，或该序列经替换、缺失或添加一个或几个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列，其特征在于，包括以下步骤：

1）编码外源蛋白Bt的基因的克隆与鉴定：从转基因植物中通过PCR或基因分离的方法获得外源蛋白Bt的基因序列，转化至宿主菌中克隆扩增，再通过PCR、琼脂糖凝胶电泳及序列测定分析鉴定目的片段；

2）含有外源目的片段的诱饵质粒载体的构建：回收目的片段，酶切后与载体pGBKT7连接，并转化入大肠杆菌中，筛选阳性克隆，即构建得到可表达BD-Bait融合蛋白的质粒；

3）人cDNA文库的构建；

4）可表达AD-Library/prey融合蛋白的质粒：构建于pGADT7载体上的人cDNA文库，购自Clontech公司；

5）用酵母双杂交的方法筛选人的cDNA文库中与外源蛋白相互作用的候选蛋白；

6）用免疫共沉淀的方法进一步验证阳性互作蛋白，从而筛得与转基因植物外源Bt蛋白相互作用的人类蛋白NDUFA10。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，步骤6）具体为：将步骤5）中获得的候选蛋白与外源蛋白Bt分别构建到载体pRK-HA和pRK-Flag上，与不同tag标签形成融合蛋白，然后用磷酸钙介导法共转染人胚胎肾细胞HEK293，20-24h后裂解细胞，与protein A偶联的Sepherose孵育沉淀，最后通过Western blot检测分析阳性互作的结果。