[发明专利]与转基因植物外源Bt蛋白相互作用的人类蛋白NDUFA10

说明书

技术领域

本发明涉及转基因生物食品安全和基因工程领域，具体地说，涉及一种与转基因植物外源Bt蛋白相互作用的人类蛋白NDUFA10。

背景技术

按照联合国粮农组织（FAO）的定义，生物安全是指“避免由于对具有感染能力的有机体或者遗传修饰有机体的研究和商品化生产而对人类的健康和安全以及环境的保护带来的风险”，可归纳为生态风险、食品安全和非预期效应三个方面。转基因生物中由于外源蛋白的引入在受体生物中表达而引起的生物安全问题引起了科学和民众的普遍关注。在转基因生物安全性评价的诸多项目中，食品的安全性问题是目前全球公众争论的热点之一，其原因在于转基因生物食用安全性评价具有显著的难以预测性和特异性。转基因食品可能产生的安全性问题主要包括：1）转基因食品中的外源基因及其表达产物对人体产生毒性；2）导入受体中的外源基因序列或其表达的蛋白质的氨基酸序列与已知的致敏原具有同源性、甚至产生出新的致敏原，使转基因食品具有过敏性；3）由于目前在遗传操作过程中选用的载体大多数具有抗生素抗性标记，因此抗生素抗性基因可能被转移到人和动物体内外的微生物中，从而产生耐药性的微生物；4）转基因食品的营养质量下降。由于外源基因的来源不同和导入位点的随机性，极有可能产生基因缺失、错码等突变，使所表达的蛋白质产物的性状、数量及在生物中的表达部位与期望值不符，导致转基因食品的营养质量下降或无法被人体有效地吸收利用。人类是转基因食品的直接或间接的消费者，而且是最终的消费者，因此公众必然会对转基因食品的安全性问题十分关注。因此，加强转基因植物的安全评价，特别是食用安全评价具有十分重要的意义。

在转基因生物食品安全评价中，目前采用的传统方法都是将转基因植物及其产品用于饲喂实验动物，来观察实验动物各项生理指标的改变，以此评估转基因生物的安全性。但是，由于转基因生物在经过实验动物消化道时面临消化与吸收的问题，并不一定会进入实验动物体内，因此很难得到明确的结论，这也是公众对转基因生物安全评价质疑较多的地方。因此，如何评价转基因生物的潜在风险成为亟待解决的问题。

发明内容

本发明的目的是提供一种与转基因植物外源Bt蛋白相互作用的人类蛋白NDUFA10。

为了实现本发明目的，本发明提供一种与转基因植物外源Bt蛋白相互作用的人类蛋白NDUFA10，所述人类蛋白NDUFA10的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，或该序列经替换、缺失或添加一个或几个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。

所述人类蛋白NDUFA10为人类NADH脱氢酶（辅酶）1α亚复合体蛋白，是由核基因编码的线粒体蛋白。哺乳类中复合体I是线粒体电子传递链上的第一个酶，由45个不同的亚蛋白单位组成。NDUFA10片段是该蛋白疏水部的片段并且具有NADH脱氢酶和氧化还原酶的活性，它将NADH上的电子传递给呼吸链。

应当理解，本领域技术人员可根据本发明公开的氨基酸序列，在不影响其活性的前提下，取代、缺失和/或添加一个或几个氨基酸，得到所述蛋白NDUFA10的突变序列。

其是利用酵母双杂交的方法通过转基因植物中外源蛋白对人的cDNA文库进行筛选，获得与外源蛋白相互作用的人体蛋白，并通过免疫共沉淀的方法对互作进行阳性验证，从而筛选得到与转基因植物中外源蛋白发生相互作用的人体蛋白。

本发明还提供编码上述蛋白NDUFA10的基因，其核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。

本发明还提供含有编码上述蛋白NDUFA10的基因的载体。

本发明还提供含有编码上述蛋白NDUFA10的基因的转基因细胞系。

本发明还提供含有编码上述蛋白NDUFA10的基因的工程菌。

本发明还提供上述蛋白NDUFA10在转基因生物安全评价领域中Bt蛋白对人体潜在风险的预测中的应用，即如果外源Bt蛋白通过某种途径进入人体内部，则会影响NDUFA10正常的生理功能，在研究转基因植物安全时，可以将蛋白NDUFA10及其信号通路的下游蛋白作为监测指标。

本发明进一步提供筛选与转基因植物外源Bt蛋白相互作用的人类蛋白NDUFA10的方法：利用酵母双杂交的方法通过转基因植物中外源Bt蛋白对人的cDNA文库进行筛选，获得与外源蛋白相互作用的人类蛋白，并通过免疫共沉淀的方法对互作进行阳性验证，从而筛选得到与转基因植物外源Bt蛋白相互作用的人类蛋白NDUFA10，所述人类蛋白NDUFA10的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，或该序列经替换、缺失或添加一个或几个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。

具体包括以下步骤：