[发明专利]一种同时检测肿瘤相关成纤维细胞和其表达蛋白的方法

权利要求书

1.一种同时检测肿瘤相关成纤维细胞和其表达蛋白的方法，该方法采用第一种量子点标记所述肿瘤相关成纤维细胞标记物的抗体，或者标记能与所述成纤维细胞标记物的抗体特异结合的二抗，或者标记链霉亲和素，以及至少第二种量子点标记其表达蛋白的抗体，或者标记能与所述其表达蛋白的抗体特异结合的二抗，或者标记链霉亲和素，其中第一种量子点和第二种量子点的发射波长不同，第一种量子点和第二种量子点不同时标记链霉亲和素。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述肿瘤相关成纤维细胞标记物为α-SAM。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述表达蛋白为肿瘤标记物。

4.根据权利要求1~3任一项所述的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1).将石蜡包埋的组织4μm厚切片固定于经多聚赖氨酸处理的防脱玻片上，然后脱蜡，水化，用TBS缓冲液冲洗3次，每次3-4min；

(2)配制0.01M pH6.0柠檬酸缓冲液，其中A液：0.1M/L柠檬酸：柠檬酸21.0g，加蒸馏水调至1000mL，浓盐酸调pH值为6.0；B液：0.1M/L 柠檬酸钠溶液：柠檬酸钠29.41g，加蒸馏水调至1000mL，取A液1.9mL，B液8.1mL，加蒸馏水90mL，95 C微波抗原修复10min，冷却30min，TBS冲洗3次，每次3-4min；

(3)滴加2%胎牛血清白蛋白封闭缓冲液，37C 孵育20-30min；

(4)滴加兔抗人待检测表达蛋白抗体和鼠抗人成纤维细胞标记物α-SAM抗体的混合物，37C 湿盒中孵育1-2h或4C过夜；

(5)滴加2%BSA稀释的生物素化羊抗兔或鼠IgG，37 C湿盒孵育30-60min；

TBS-T溶液洗涤切片3次，每次3-4min；

加2%BSA封闭缓冲液，37C 湿盒中孵育15-20min；

(6)滴加2% BSA稀释的波长为605nm的QDs标记的链霉亲和素复合物和波长为545nm的QDs标记的羊抗鼠或羊抗兔IgG；37 C湿盒孵育 30 -60min，TBS-T溶液洗涤3次，每次3-4min；

(7)TBS溶液洗涤2次，每次3-4min；

(8)90％缓冲甘油封片，上荧光显微镜，紫外光同时激发两种QDs，以细胞内出现橙红色和绿色的荧光颗粒为阳性。

5.量子点在制备检测肿瘤相关成纤维细胞和其蛋白表达试剂中的应用。

6.用于检测肿瘤相关成纤维细胞和其蛋白表达的试剂盒，其包括第一种量子点标记的所述肿瘤相关成纤维细胞标记物的抗体，或者标记的能与所述成纤维细胞标记物的抗体特异结合的二抗，或者标记的链霉亲和素，以及至少第二种量子点标记的其表达蛋白的抗体，或者标记的能与所述其表达蛋白的抗体特异结合的二抗，或者标记的链霉亲和素，其中第一种量子点和第二种量子点的发射波长不同，第一种量子点和第二种量子点不同时标记链霉亲和素。

7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述肿瘤相关成纤维细胞标记物为α-SAM。

8.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述表达蛋白为肿瘤标记物。

9.根据权利要求6~8任一项所述的试剂盒，其特征在于，其还包括以下试剂中的一种或多种：TBS缓冲液、柠檬酸缓冲液和封闭缓冲液。