[发明专利]一种采用碲化镉量子点清除帕金森模式细胞中产生的α-核突触蛋白的方法及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物纳米材料领域，具体涉及一种采用碲化镉量子点清除帕金森模式细胞中产生的α-核突触蛋白的方法及其应用。 

背景技术

帕金森症（Parkinson’s disease，PD）是一种最常见的神经退行性疾病，在全世界40岁以上的人口中,有超过0.1%的人受到该疾病的影响。在临床上多数病人在表现为活动失调及静止时不自主的颤抖，心情烦躁、抑郁或精神异常，给社会和病人家庭带来了极大的经济与精神负担，因而对此疾病的研究也越来越受到人们的重视。帕金森症在病理学表现为患者大脑黑质致密部多巴胺神经元的丧失，路易包涵体增多。而路易体主要是由一些称为α-核突触蛋白错误折叠和聚集形成的淀粉样蛋白质纤维组成，另外这种错误折叠的蛋白在体内积累也对多巴胺神经元有很大的毒性，促使其凋亡。进一步研究发现α-核突触蛋白的过表达和错误折叠在帕金森症形成过程中具有重要作用。 

很多研究发现细胞自噬可以帮助神经元细胞清除具有细胞毒性的异常蛋白质的积累的作用，而细胞自噬是一种广泛存在于真核细胞内的溶酶体依赖性的降解途径,与人体生理过程和疾病有着密切的关系，例如肿瘤、神经变性、微生物感染和老化均与自噬的功能失调有关。目前，已有多种纳米材料被报道可以诱导细胞产生自噬。其中，不同类型的量子点也被Nano Lett和Angew Chem杂志报道可以使细胞发生自噬。 

而α-核突触蛋白的异常积聚又与其降解通路的障碍有关，自噬的激活不仅可以降低聚集体的形成，而且可以明显改善其行为表现。然而以往对α-核突触蛋白降解的研究主要集中在泛素化降解途径，只是近几年的报道显示，自噬也参与了α-核突触蛋白的降解，并发挥更重要的角色。因而，通过调控 自噬进而促进α-核突触蛋白的清除成为延缓帕金森疾病进展的一个潜在治疗靶点。但是，直到目前为止，都还未曾出现通过有效引发帕金森模式细胞的自噬进而清除细胞内有毒的α-核突触蛋白的研究。 

发明内容

本发明旨在提供一种采用碲化镉量子点清除帕金森模式细胞中产生的α-核突触蛋白的方法及其应用。 

本发明涉及一种采用碲化镉量子点清除帕金森模式细胞中产生的α-核突触蛋白的方法，包括：将帕金森模式细胞消化获得的细胞悬液按每孔3×10⁴~3×10⁵个铺6孔板，待细胞贴壁后吸掉孔内培养基，并向其中加入含有4-75nM碲化镉量子点的培养基，所述帕金森模式细胞中过量表达的α-核突触蛋白在所述碲化镉量子点的作用下得到明显清除；其中，所述帕金森模式细胞是使用1-甲基-4-苯基-吡啶离子在体外构建并使用全反式维甲酸和十四烷酰佛波醇乙酸酯诱导分化的SH-SY5Y细胞或使用1-甲基-4-苯基-吡啶离子在体外构建的分化的PC12细胞。 

所述碲化镉量子点的浓度优选为4-18nM。 

所述碲化镉量子点的浓度优选为4nM。 

所述SH-SY5Y细胞的帕金森模式细胞的构建方法包括：1）细胞分化：将所述SH-SY5Y细胞在含有0.01mM全反式维甲酸（ATRA）的培养基中培养2~3天后，换含80nM十四烷酰佛波醇乙酸酯（TPA）的培养基继续培养2~3天，然后换不含有分化剂的培养基培养1~2天；2）细胞铺板：待分化细胞长满后消化获得细胞悬液，进行细胞计数，按每孔3×10⁴~3×10⁵个铺6孔板；3）加药处理：待6孔板内细胞贴壁后，吸掉孔内培养基，加入0.5-50mM1-甲基-4-苯基-吡啶离子（MPP⁺）的培养稀释液，孵育60~72小时。 

其中，所述步骤3）中1-甲基-4-苯基-吡啶离子的浓度优选为1mM。 

所述PC12细胞的帕金森模式细胞的构建方法包括：1）细胞铺板：将所述PC12细胞消化获得的细胞悬液进行细胞计数，按每孔3×10⁴~3×10⁵个细胞铺6孔板；2）加药处理：待6孔板内细胞贴壁后，吸掉孔内培养基，加入0.5-50mMmM1-甲基-4-苯基-吡啶离子（MPP⁺）的培养稀释液2ml，孵育36~48小时。 

其中，所述步骤2）中MPP⁺的浓度优选为5mM。 

所述碲化镉量子点的粒径为3-5nm。 

所述碲化镉量子点由微波法合成。 

本发明还提供一种碲化镉量子点作为制备治疗帕金森症药物的应用。 

所述碲化镉量子点的粒径为3-5nm。