[发明专利]奥拉西坦及其杂质的分析检测方法

说明书

技术领域

本发明属于药物分析化学领域，涉及对促智药奥拉西坦质量进行分析的方法，具体涉及用液相色谱法(HPLC)分离测定奥拉西坦及其多种已知杂质的分析方法。

背景技术

奥拉西坦(Oxiracetam,CAS62613-82-5)，化学名为2-(4-羟基吡咯烷-2-酮-1-基)乙酰胺，是一种促进学习，增强记忆力的新型中枢神经系统药物，该活性成分是一种合成的羟基氨基丁酸(BABOB)环状衍生物，仅作用于中枢神经系统，主要分布在大脑皮层、海马，有激活、保护或促进神经细胞的功能恢复，改善智能障碍患者的记忆和学习功能，而药物本身没有直接的血管活性，也没有中枢兴奋作用，对学习记忆能力的影响是一种持久的促进作用。机理研究结果显示，奥拉西坦可促进磷脂酰胆碱和磷脂酰乙醇胺的合成，促进脑代谢，提高血脑屏障对特异中枢神经道路的刺激作用，提高大脑中ATP/ADP的比值，使大脑中蛋白质和核酸的合成增加。

奥拉西坦于1987年在意大利上市，上市的剂型为片剂，800mg；胶囊，800mg；注射液，1g/5ml。目前国内只有奥拉西坦胶囊和注射液上市，且所用主要活性成分均为外消旋体。研究发现，与外消旋体比较，(S)-4-羟基-2-氧代-1-吡咯烷乙酰胺(在本文中亦可称为S-奥拉西坦或者左旋奥拉西坦)，具有更好的疗效和更低的毒副作用。

S-奥拉西坦构型其分子式与分子量分别为：C6H10N2O3，Mr.158.16；其结构式为：

其合成工艺中会引入及产生4-羟基-2氧代-1-醋酸吡咯烷(本发明中简称杂质A)、甘氨酸酐(合成甘氨酰胺盐酸盐的起始原料，本发明中简称杂质B)、2-吡咯啉-2-1-乙酰胺基(产品脱水后的产品，降解产物，本发明中简称杂质C)、2-（4-羟基-2-氧代-1-乙酰胺基吡咯烷）(乙酰胺合成杂质，副产物，本发明中简称杂质D)。因此，实现奥拉西坦及其各杂质间的有效分离对测定奥拉西坦和各杂质的量具有重大的意义。

现有技术中已有针对奥拉西坦的纯度检测，具体如下：色谱柱为C18，以甲醇:水(40:60)为流动相，检测波长为214nm。我们以奥拉西坦进行了方法学验证，结果表明：该方法在样品的降解试验中并不能把降解峰与已知杂质很好的分离，且未能检出所有的降解峰。因此本领域仍然期待有用于控制奥拉西坦质量的有效方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种可用于控制奥拉西坦质量的有效方法。本发明人令人意外地发现，用特定的色谱分析条件例如使用C18色谱柱或C8色谱柱分离测定奥拉西坦及其制剂有关物质的高效液相色谱方法，例如使用甲醇-乙腈-磷酸盐缓冲液作为流动相，可以有效地实现奥拉西坦及其杂质的分离及测定。

为此，本发明第一方面提供了一种奥拉西坦质量分析的方法，该方法包括使用高效液相色谱法对奥拉西坦原料药或者包含奥拉西坦的药物制剂进行质量分析的步骤。

根据本发明第一方面的方法，其中所述高效液相色谱法使用的色谱柱是以十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱。

根据本发明第一方面的方法，其中所述高效液相色谱法使用的色谱柱的填料粒度为3~10μm，优选填料粒度为5μm。

根据本发明第一方面的方法，其中所述高效液相色谱法使用的色谱柱的内径为3~10mm，优选色谱柱的内径为4.6mm。

根据本发明第一方面的方法，其中所述高效液相色谱法使用的色谱柱的柱长为150~300mm，优选色谱柱的柱长为250mm。

根据本发明第一方面的方法，高效液相色谱法使用的色谱柱的填料粒径5μm，色谱柱的内径为4.6mm，色谱柱的柱长为250mm。以上型号参数可以简写为5μm，4.6×250mm，或简写为4.6mm×25cm×5μm，或其它类似简写方式。

根据本发明第一方面的方法，其中所述高效液相色谱法使用的色谱柱是AQ色谱柱。

根据本发明第一方面的方法，其中所述高效液相色谱法使用的色谱柱是AQ-C18色谱柱。

根据本发明第一方面的方法，其中所述高效液相色谱法使用的色谱柱是品牌为月旭AQ-C18的色谱柱。

根据本发明第一方面的方法，其中所述高效液相色谱法使用的色谱柱是品牌为月旭C8的色谱柱。

根据本发明第一方面的方法，其中所述高效液相色谱法分离分析时色谱柱的柱箱温度是30~40℃，例如33~37℃，例如约35℃。本发明已经发现，在柱箱温度为33~37℃的范围内具有相当好的分离效果。