[发明专利]液体发酵生产冬虫夏草菌粉的方法

权利要求书

1.液体发酵生产冬虫夏草菌粉的方法，其特征在于包括如下步骤：

1）斜面菌种培养；

2）大米孢子培养；

3）发酵培养，包括一级种子罐培养和二级发酵培养；

4）制备菌粉。

2.如权利要求1所述的液体发酵生产冬虫夏草菌粉的方法，其特征在于在步骤1）中，所述斜面菌种培养的具体方法如下：配制斜面培养基，所述斜面培养基的组分为：葡萄糖15～35g/L、蛋白胨0.5～4g/L、MgSO₄·7H₂O1～5g/L、KH₂PO₄0.5～1g/L、大豆浸汁150～250mL/L、辅液Ⅰ1～4mL/L、琼脂20～25g/L、其余为水，pH5.9～6.6，以上各组分除辅液Ⅰ外，于121℃灭菌30min，辅液Ⅰ于118℃单独灭菌22min后加入无菌培养基，接种环粘少量无菌水，把冬虫夏草菌种从保藏斜面上接入无菌斜面进行培养，待斜面长满新鲜成熟孢子即可；所述冬虫夏草菌种为冬虫夏草（Cordycepes sinensis(Berk.）Sacc），购自中国农业微生物菌种保藏管理中心，保藏号为ACCC50562。

3.如权利要求2所述的液体发酵生产冬虫夏草菌粉的方法，其特征在于所述辅液Ⅰ组分为：盐酸硫胺1～4g/L、核黄素1～4g/L、维生素B30.5～1g/L、盐酸吡哆素0.6～1.2g/L、甘氨酸0.8～1.4g/L、生物素0.08～1.2g/L、赤霉素0.02～0.04g/L、NaSeO₃0.001～0.004g/L，其余为水。

4.如权利要求2所述的液体发酵生产冬虫夏草菌粉的方法，其特征在于所述大豆浸汁的制备方法为：称取150～200g马铃薯，洗净去皮切碎，加水煮沸半个小时，纱布过滤，最后定容到1000mL。

5.如权利要求2所述的液体发酵生产冬虫夏草菌粉的方法，其特征在于所述培养的条件为：湿度控制在45%～55%，在15～18℃下恒温培养15～25天。

6.如权利要求1所述的液体发酵生产冬虫夏草菌粉的方法，其特征在于在步骤2）中，所述大米孢子培养的具体方法如下：配制固料培养基，由固料以及营养液组成，其中固料∶营养液=1g∶（0.5～0.7）mL，固料由大米和麸皮组成，其中大米∶麸皮按质量比为7∶3，营养液组分除去琼脂以外与斜面培养基的组分相同，固料与营养液混匀后75～80℃蒸或煮，冷却至室温后将成团的大米弄散，装入K瓶，121℃灭菌30～40min，灭菌完后充分抖散，使固料培养基厚度保持在1～4cm，向长满孢子的斜面加入无菌生理盐水，用接种铲将孢子刮下，将孢子浓度控制在1.0～2.5×10⁶个/mL，按固料质量体积比的3%～6%将孢子悬液均匀的喷在固料培养基的表面，抖动均匀后保持厚度在1～4cm，培养条件为湿度控制45%～55%，温度控制15～18℃，每隔6h翻抖一次固料，待长出菌丝体后静止培养，长满孢子后加入无菌生理盐水震荡制成孢子悬液，其中每粒亲米孢子数量为0.02～0.04×10⁹个/粒，按照体积比为1%～5%接入一级种子罐培养。

7.如权利要求4所述的液体发酵生产冬虫夏草菌粉的方法，其特征在于所述蒸或煮的时间为30～40min；所述静止培养的时间为5～9d；所述孢子的浓度可为0.8～1.6×10⁹个/L。