[发明专利]液体发酵生产冬虫夏草菌粉的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种菌粉，尤其是涉及一种液体发酵生产冬虫夏草菌粉的方法。

背景技术

冬虫夏草，是麦角菌科真菌冬虫夏草寄生在蝙蝠蛾科昆虫幼虫上的子座及幼虫尸体的复合体，是一种传统的名贵滋补中药材，有调节免疫系统功能、抗肿瘤、抗疲劳等多种功效。

冬虫夏草生长在寒冷高海拔的地区，其生长的环境和条件比较苛刻。由于野生虫草的生长环境不断受到破坏，虫源锐减，加上人为采集的过量过早，导致野生虫草资源日益匮乏。为了满足市场需求，人工培养冬虫夏草成为了主要的来源。

但因为其工艺复杂，生长周期长及产量低的问题就出现人工发酵冬虫夏草的方法。通过科研工作者的不断研究，发现人工发酵虫草菌丝体其主要药理药化成分基本类似于天然虫草，这就为冬虫夏草人工发酵奠定了重要的理论支持。

在国内也有很多科研工作者发表了相关的专利，中国专利CN1478886A公开一种中国被毛胞液体菌种发酵工艺方法，该申请公开了发酵所用的菌种的获取、一级固体三角瓶菌种培养、液体种子培养、液体发酵罐生产工序，其不足之处是发酵周期长，为456h。中国专利CN101134940B公开一种冬虫夏草真菌-蝙蝠蛾被毛胞的发酵方法，该申请公开了发酵所用培养基成分、发酵工艺控制参数，其不足之处是发酵周期长，发酵周期长达720h，能耗高，发酵罐利用率低。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种液体发酵产生冬虫夏草菌粉的方法，克服了现有技术中冬虫夏草液体发酵周期过长、菌丝得率低以及发酵罐利用率低等问题。

本发明包括如下步骤：

1）斜面菌种培养：

配制斜面培养基，所述斜面培养基的组分为：葡萄糖15～35g/L、蛋白胨0.5～4g/L、MgSO₄·7H₂O1～5g/L、KH₂PO₄0.5～1g/L、大豆浸汁150～250mL/L、辅液Ⅰ1～4mL/L、琼脂20～25g/L、其余为水，pH5.9～6.6，以上各组分除辅液Ⅰ外，于121℃灭菌30min，辅液Ⅰ于118℃单独灭菌22min后加入无菌培养基，接种环粘少量无菌水，把冬虫夏草菌种从保藏斜面上接入无菌斜面进行培养，待斜面长满新鲜成熟孢子即可；

在步骤1）中，所述冬虫夏草菌种为冬虫夏草（Cordycepes sinensis（Berk.）Sacc）菌种，购自中国农业微生物菌种保藏管理中心，保藏号为ACCC50562；

所述辅液Ⅰ组分可为：盐酸硫胺1～4g/L、核黄素1～4g/L、维生素B30.5～1g/L、盐酸吡哆素0.6～1.2g/L、甘氨酸0.8～1.4g/L、生物素0.08～1.2g/L、赤霉素0.02～0.04g/L、NaSeO₃0.001～0.004g/L，其余为水；

所述大豆浸汁的制备方法可为：称取150～200g马铃薯，洗净去皮切碎，加水煮沸半个小时，纱布过滤，最后定容到1000mL；

所述培养的条件可为：湿度控制在45%～55%，在15～18℃下恒温培养15～25天。

2）大米孢子培养：

配制固料培养基，由固料以及营养液组成，其中固料∶营养液=1g∶（0.5～0.7）mL，固料由大米和麸皮组成，其中大米∶麸皮按质量比为7∶3，营养液组分除去琼脂以外与斜面培养基的组分相同，固料与营养液混匀后75～80℃蒸或煮，冷却至室温后将成团的大米弄散，装入K瓶，121℃灭菌30～40min，灭菌完后充分抖散，使固料培养基厚度保持在1～4cm，向长满孢子的斜面加入无菌生理盐水，用接种铲将孢子刮下，将孢子浓度控制在1.0～2.5×10⁶个/mL，按固料质量体积比的3%～6%将孢子悬液均匀的喷在固料培养基的表面，抖动均匀后保持厚度在1～4cm，培养条件为湿度控制45%～55%，温度控制15～18℃，每隔6h翻抖一次固料，待长出菌丝体后静止培养，长满孢子后加入无菌生理盐水震荡制成孢子悬液，其中每粒亲米孢子数量为0.02～0.04×10⁹个/粒，按照体积比为1%～5%接入一级种子罐培养；

在步骤2）中，所述蒸或煮的时间可为30～40min；所述静止培养的时间可为5～9d；所述孢子的浓度可为0.8～1.6×10⁹个/L。

3）发酵培养：

（1）一级种子罐培养