[发明专利]一种新的子宫颈癌细胞的标记技术的制备方法及装置

权利要求书

1.一种新的子宫颈癌细胞的标记技术的制备方法，其特征在于，包括：

制备胶体金；

利用所述胶体金和抗上皮细胞粘附分子的抗体制备免疫金；

利用所述免疫金对预收集的样本中的上皮细胞粘附分子进行标记；

对所述样本进行制片。

2.根据权利要求1所述的新的子宫颈癌细胞的标记技术的制备方法，其特征在于，所述胶体金的制备方法包括：

（1）将氯金酸配制成浓度为0.005%-0.015%的水溶液并取100-200ml加热至沸腾；

（2）搅拌氯金酸水溶液，并向所述氯金酸水溶液加入3-6ml浓度为0.5-1.5%的柠檬酸三钠水溶液；

（3）将经过步骤（2）处理之后的溶液加热煮沸15-20分钟；

（4）冷却经过步骤（3）处理之后的溶液2-10分钟至室温后用双蒸馏水恢复所述经过步骤（3）处理之后的溶液的体积至原体积，得到胶体金溶液。

3.根据权利要求1所述的新的子宫颈癌细胞的标记技术的制备方法，其特征在于，所述利用胶体金和抗上皮细胞粘附分子的抗体制备免疫金的方法包括：

（1）调节所述胶体金溶液的pH值为7.5至8.5；

（2）将所述抗上皮细胞粘附分子的抗体置入透析袋内后放入双蒸馏水中透析2-4小时或过夜；

（3）对经过步骤（2）处理之后的溶液在4℃下进行离心力为50000-100000g的离心沉淀50-70分钟并去除所述溶液中的聚合物；

（4）取经过步骤（3）处理之后的溶液的上清液，调整所述上清液的蛋白质至0.5-1mg/ml的浓度并将调整后的上清液作为抗上皮细胞粘附分子的抗体储存液；

（5）用浓度为0.004-0.006mol/l pH值为8.5-9.5的硼酸盐缓冲液将所述抗上皮细胞粘附分子的抗体储存液作系列稀释后，取0.05-0.15ml抗上皮细胞粘附分子的抗体系列稀释液加到0.5-1.5ml所述胶体金溶液中，另设一支不加所述抗上皮细胞粘附分子的抗体系列稀释液的对照管，4-6分钟后分别向各管中加入0.05-0.15ml浓度为8-12％的NaCl溶液，混匀各管的溶液后静置1.5-2.5小时，在能使胶体金稳定的蛋白量上再加9%-11％并将所述蛋白量记为最佳标记蛋白量；

（6）调整所述上清液中蛋白量含量为所述最佳标记蛋白量并加入所述胶体金溶液并充分混合15-30分钟；

（7）向经过步骤（6）处理之后的溶液中加入浓度为2%-4%的PEG-2000使所述溶液的PEG-2000最终浓度为0.05%-0.1%并搅拌所述溶液10-15分钟；

（8）取经过步骤（7）处理之后的溶液中的沉淀部分并用含0.5%-1.5%的BSA和0.01%-0.03%的NaN₃的浓度为0.01-0.03mol/l pH值为7.0-7.4的Tris-HCl的缓冲液稀释所述沉淀部分，得到免疫金；

（9）回收所述免疫金并用微孔滤膜进行过滤除菌。

4.根据权利要求1至3中的任一项所述的新的子宫颈癌细胞的标记技术的制备方法，其特征在于，在步骤所述利用所述免疫金对预收集的样本中的上皮细胞粘附分子进行标记之后和步骤所述对样本进行制片之前还包括：

对玻片进行预处理；

对样本细胞的抗体进行孵育；

所述对玻片进行预处理包括：

用浓度为93%-97%的乙醇浸泡处理所述玻片；

用双蒸馏水清洗所述玻片；

用3-氨丙基-3-乙氧基甲硅烷包被玻片。

5.根据权利要求4所述的新的子宫颈癌细胞的标记技术的制备方法，其特征在于，在步骤所述对样本进行制片之后还包括：

利用显微镜对所述制片进行观察。

6.根据权利要求4所述的新的子宫颈癌细胞的标记技术的制备方法，其特征在于，在步骤所述对样本进行制片之后还包括：

对所述制片进行染色；

利用显微镜对所述制片进行观察。

7.一种新的子宫颈癌细胞的标记技术的制备装置，其特征在于，包括：

制备单元一，用于制备胶体金；

制备单元二，用于利用所述胶体金和抗上皮细胞粘附分子的抗体制备免疫金；

标记单元，用于利用所述免疫金对预收集的样本中的上皮细胞粘附分子进行标记；

制片单元，用于对所述样本进行制片。

8.根据权利要求7所述的新的子宫颈癌细胞的标记技术的制备装置，其特征在于，所述装置还包括：

预处理单元，用于对玻片进行预处理；

孵育单元，用于对样本细胞的抗体进行孵育。