[发明专利]一种新的子宫颈癌细胞的标记技术的制备方法及装置

说明书

技术领域

本发明实施例涉及生物医学技术领域，具体涉及一种新的子宫颈癌细胞的标记技术的制备方法及装置。

背景技术

子宫颈癌是最常见的恶性肿瘤之一，发病率位于女性肿瘤的第二位。全世界每年大约有20万妇女死于这种疾病，而对子宫颈癌前病变的早期诊断和治疗可以降低其发生率。

目前国际上较先进的一种宫颈癌细胞学检查技术是新柏氏液基细胞学检测（TCT，Thinprep Cytologic Test），TCT检查是采用液基薄层细胞检测系统检测宫颈细胞并进行细胞学分类诊断的方法，与传统的宫颈刮片巴氏涂片检查相比明显提高了标本的满意度及宫颈异常细胞检出率，同时还能发现部分癌前病变，微生物感染如霉菌、滴虫、病毒、衣原体等。

然而利用新柏氏液基细胞学检测进行病理诊断不但需要经验丰富的专家，而且即使这样，还是会出现误诊和漏诊。因此开发简便快速检测癌细胞的技术有很大的临床意义。

发明内容

本发明实施例提供了一种新的子宫颈癌细胞的标记技术的制备方法及装置，可以简单、快速和准确地对子宫颈癌细胞进行鉴别诊断。

本发明实施例提供的新的子宫颈癌细胞的标记技术的制备方法，包括：

制备胶体金；

利用所述胶体金和抗上皮细胞粘附分子的抗体制备免疫金；

利用所述免疫金对预收集的样本中的上皮细胞粘附分子进行标记；

对所述样本进行制片。

可选地，所述胶体金的制备方法包括：

（1）将氯金酸配制成浓度为0.005%-0.015%的水溶液并取100-200ml加热至沸腾；

（2）搅拌氯金酸水溶液，并向所述氯金酸水溶液加入3-6ml浓度为0.5-1.5%的柠檬酸三钠水溶液；

（3）将经过步骤（2）处理之后的溶液加热煮沸15-20分钟；

（4）冷却经过步骤（3）处理之后的溶液2-10分钟至室温后用双蒸馏水恢复所述经过步骤（3）处理之后的溶液的体积至原体积，得到胶体金溶液。

可选地，所述利用胶体金和抗上皮细胞粘附分子的抗体制备免疫金的方法包括：

（1）调节所述胶体金溶液的pH值为7.5至8.5；

（2）将所述抗上皮细胞粘附分子的抗体置入透析袋内后放入双蒸馏水中透析2-4小时或过夜；

（3）对经过步骤（2）处理之后的溶液在4℃下进行离心力为50000-100000g的离心沉淀50-70分钟并去除所述溶液中的聚合物；

（4）取经过步骤（3）处理之后的溶液的上清液，调整所述上清液的蛋白质至0.5-1mg/ml的浓度并将调整后的上清液作为抗上皮细胞粘附分子的抗体储存液；

（5）用浓度为0.004-0.006mol/l pH值为8.5-9.5的硼酸盐缓冲液将所述抗上皮细胞粘附分子的抗体储存液作系列稀释后，取0.05-0.15ml抗上皮细胞粘附分子的抗体系列稀释液加到0.5-1.5ml所述胶体金溶液中，另设一管不加所述抗上皮细胞粘附分子的抗体系列稀释液的对照管，4-6分钟后分别向各管中加入0.05-0.15ml浓度为8-12％的NaCl溶液，混匀各管的溶液后静置1.5-2.5小时，在能使胶体金稳定的蛋白量上再加9%-11％并将所述蛋白量记为最佳标记蛋白量；

（6）调整所述上清液中蛋白量含量为所述最佳标记蛋白量并加入所述胶体金溶液并充分混合15-30分钟；

（7）向经过步骤（6）处理之后的溶液中加入浓度为2%-4%的PEG-2000使所述溶液的PEG-2000最终浓度为0.05%-0.1%并搅拌所述溶液10-15分钟；

（8）取经过步骤（7）处理之后的溶液中的沉淀部分并用含0.5%-1.5%的BSA和0.01%-0.03%的NaN₃的浓度为0.01-0.03mol/l pH值为7.0-7.4的Tris-HCl的缓冲液稀释所述沉淀部分，得到免疫金；

（9）回收所述免疫金并用微孔滤膜进行过滤除菌。

可选地，在步骤所述利用所述免疫金对预收集的样本中的上皮细胞粘附分子进行标记之后和步骤所述对样本进行制片之前还包括：

对玻片进行预处理；

对样本细胞的抗体进行孵育；

所述对玻片进行预处理包括：

用浓度为93%-97%的乙醇浸泡处理所述玻片；

用双蒸馏水清洗所述玻片；

用3-氨丙基-3-乙氧基甲硅烷包被玻片。

可选地，在步骤所述对样本进行制片之后还包括：